Metody GC-MS pro léčiva

[G.Patton]

Úvod: V knize je popsán vývoj chemických látek, které jsou součástí chemického průmyslu:

Mám rozsáhlé zkušenosti s určováním kvality léčiv pomocí chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Rozhodl jsem se napsat tento návod pro chemiky, kteří chtějí začít testovat léčiva pomocí zařízení GC-MS.
I přes široké možnosti chromato-masové spektrometrie existují omezení možností. Hmotnostní detektor v tandemu s chromatografem nemůže stanovit anorganické látky, organické látky s molekulovou hmotností vyšší než 450 Da nebo organické látky s vysokou teplotou varu (>350 ◦C).

Vlastnosti zařízení:

Nejprve je třeba definovat možnost provádět analýzu pomocí plynového chromatografu. Pro tyto účely lze použít nejoblíbenější vhodné systémy GC-MS jako plynový chromatograf Agilent 7890 spojený s kvadrupólovým hmotnostním detektorem Agilent 5975C nebo GC-MS Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole. Hlavní vlastnost, kterou je třeba znát - to je polarita kapilární kolony. Pro většinu léčiv potřebujete nepolární nebo slabě polární kapilární kolonu. Například HP-1/DB-1 nebo HP-5/DB-5 jsou nejlepší volbou pro širokou škálu aplikací. Také je třeba znát rozsah hmotností, které může váš hmotnostní detektor detekovat v režimu SCAN. Obvykle požadujete rozsah 30-450 m/z, to stačí k určení všech typů léčiv. Většinu z nich lze stanovit v rozmezí 30-350 m/z.

Postup přípravy vzorku:

Všechny léčivé látky zůstávají ve formě soli díky vyšší stabilitě, která umožňuje jejich dlouhodobé uchovávání bez strukturních změn. Například amfetamin má atom dusíku, je to báze, která je vázána s kyselými ionty jako 2-(SO4), -Cl, 3-(PO4). Je třeba získat volnou bázi analytické látky. Také pokud nevíte, jakou látku máte k analýze, musíte provést experiment pro kvalitativní stanovení pomocí činidel, o kterých jsem se zmínil dříve(činidla pro testování drog).

Univerzální příprava bude poměrně jednoduchá. Umístěte alikvotní část vzorku do baňky a naplňte ji čistým rozpouštědlem (CCl4/ CH2Cl2). Připravte přibližně 10-1000 mkg/ml roztoku. Většinu omamných látek nelze v tetrachlormethanu/dichlormethanu rozpustit. Poté je třeba do této baňky s roztokem drogy přidat 1-2 objemy 30-40% vodného roztoku NaOH/KOH a důkladně promíchat.

Téměř stejná příprava se používá pro značky(LSD, NBOMe, NBOH atd. ). Vezměte značku s deklarovaným množstvím látky a nařízněte ji do baňky, přidejte čisté rozpouštědlo (doporučuje se CH2Cl2). Připravte přibližně 10-1000 mkg/ml roztoku. Poté je třeba do této baňky s roztokem léčiva přidat 1-2 objemy 30-40% vodného roztoku NaOH/KOH a důkladně promíchat.

Získáte volnou bázi analyzovaného léčiva, která bude migrovat do vrstvy organického rozpouštědla. Musíte vstříknout 1 mkl roztoku léčiva a zahájit analýzu.

Metody GC-MS.
Pro širokou škálu léčiv:

GC-MS systém pracující při 70 eV v režimu elektronové ionizace. Přístroj je vybaven 5% fenylmetylsilikonovou kapilární kolonou (30 m × 0,25 mm i.d., tloušťka vrstvy 0,25 m). Jako nosný plyn se používá helium s konstantním průtokem 1 ml/min. Chromatografické podmínky byly nastaveny takto: Teplota v peci se udržuje na 130 ◦C po dobu 2 min, poté se zvýší na 270 ◦C při rychlosti 15 ◦C/min. Vstřikovací port se nastaví na 270 ◦C v režimu rozdělení s rozdělením 25:1. Hmotnostní detektor pracuje v režimu skenování (rozsah skenování od m/z 30-390).

Pro značky LSD, NBOMe, NBOH:

Systém GC-MS pracuje při 70 eV v režimu elektronové ionizace. Přístroj je vybaven 5% fenylmetylsilikonovou kapilární kolonou (30 m × 0,25 mm i.d., tloušťka vrstvy 0,25 m). Jako nosný plyn se používá helium s konstantním průtokem 1 ml/min. Chromatografické podmínky byly nastaveny takto: Teplota v peci se udržuje na 40 ◦C po dobu 2 min, poté se zvýší na 210 ◦C při 15 ◦C/min, po zvýšení na 280 ◦C při 5 ◦C/min a udržuje se 20 min. Vstřikovací port nastaven na 280 ◦C v režimu splitless. Hmotnostní detektor pracoval v režimu skenování (rozsah skenování od m/z 30-450).

Závěr:
Jak je vidět, příprava vzorků je poměrně jednoduchá. Nepotřebuje drahá činidla ani složitou manipulaci. Tento postup je však velmi důležitý pro získání relevantních výsledků analýzy.

 

[Cocojamba]

Co další systémy GC-MS? Nebo tyto metody fungují pouze se systémy Agilent nebo Thermo Scientific?

 

[G.Patton]

Ve skutečnosti ne, můžete použít jakýkoli systém se stejnými specifikacemi.