GC-MS-metoder til lægemidler

[G.Patton]

Introduktion:

Jeg har stor erfaring med at bestemme kvaliteten af lægemidler ved hjælp af kromatografi-massespektrometri. Jeg besluttede at skrive denne instruktion til kemikere, som gerne vil i gang med at teste lægemidler med GC-MS-udstyr.
På trods af den brede vifte af kromatografi-massespektrometri-muligheder er der begrænsninger i mulighederne. Massedetektor i tandem med kromatograf kan ikke bestemme uorganiske stoffer, organiske stoffer med en molekylvægt på mere end 450 Da eller organiske stoffer med høj kogetemperatur (>350 ◦C).

Udstyrets egenskaber:

Først skal du definere din mulighed for at foretage analyser ved hjælp af din gaskromatograf. De mest populære GC-MS-systemer som Agilent 7890 gaskromatograf, koblet til en Agilent 5975C quadrupol massedetektor eller Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole GC-MS kan bruges til disse mål. Den vigtigste egenskab, som du skal kende - det er polariteten af en kapillarsøjle. Til de fleste lægemidler har du brug for en ikke-polær eller svagt polær kapillarsøjle. For eksempel er HP-1/DB-1 eller HP-5/DB-5 det bedste valg til en lang række anvendelser. Du skal også kende det masseområde, som din massedetektor kan detektere i SCAN-tilstand. Normalt har du brug for et område på 30-450 m/z, det er nok til at bestemme alle typer stoffer. De fleste af dem kan bestemmes mellem 30-350 m/z.

Procedure for prøveforberedelse:

Alle stoffer forbliver i saltform på grund af højere stabilitet, hvilket gør det muligt at opbevare dem i lang tid uden strukturelle ændringer. For eksempel har amfetamin et nitrogenatom, det er basen, som er bundet med syreioner som 2-(SO4), -Cl, 3-(PO4). Du skal finde den frie base for analysestoffet. Hvis du ikke ved, hvilket stof du har til analyse, skal du også udføre et eksperiment til kvalitativ bestemmelse ved hjælp af reagenser, som jeg nævnte tidligere (reagenser til narkotikatestning).

Universel forberedelse vil være ganske enkel. Anbring en alikvot del af prøven i en kolbe, og fyld den med et rent opløsningsmiddel (CCl4/CH2Cl2). Forbered ca. 10-1000 mkg/ml af opløsningen. De fleste narkotiske stoffer kan ikke opløses i carbontetrachlorid/dichlormethan. Derefter skal du tilføje 1-2 volumen 30-40% NaOH / KOH vandig opløsning i denne kolbe med lægemiddelopløsning og blande den grundigt.

Næsten det samme præparat bruges til mærker (LSD, NBOMe, NBOH osv. ). Tag et mærke med den angivne mængde stof, og skær det over i en kolbe, tilsæt rent opløsningsmiddel (CH2Cl2 anbefales). Forbered ca. 10-1000 mkg/ml af opløsningen. Derefter skal du tilføje 1-2 volumen 30-40% NaOH/KOH vandig opløsning i denne kolbe med lægemiddelopløsning og blande det grundigt.

Du vil få en fri base af det analyserede lægemiddel, som vil migrere til det organiske opløsningsmiddellag. Du skal injicere 1 mkl lægemiddelopløsning og starte analysen.

GC-MS-metoder.
Til et stort udvalg af lægemidler:

GC-MS-systemet arbejder ved 70 eV i elektronioniseringstilstand. Apparatet er udstyret med en 5 % phenyl-methylsilikone-kapillarsøjle (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m filmtykkelse). Helium anvendes som bæregas ved et konstant flow på 1 ml/min. De kromatografiske betingelser blev indstillet som følger: Ovntemperaturen holdes på 130 ◦C i 2 minutter, øges til 270 ◦C ved 15 ◦C/min. Injektionsporten indstilles til 270 ◦C i split-tilstand med split raito 25:1. Massedetektoren fungerer i scanningstilstand (scanningsområde fra m/z 30-390).

For LSD, NBOMe, NBOH mærker:

GC-MS-systemet arbejder ved 70 eV i elektronioniseringstilstand. Apparatet er udstyret med en 5 % phenyl-methylsilikone-kapillarsøjle (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m filmtykkelse). Helium bruges som bæregas ved et konstant flow på 1 mL/min. De kromatografiske betingelser blev indstillet som følger: Ovntemperaturen holdes på 40 ◦C i 2 minutter, øges til 210 ◦C ved 15 ◦C/min, efter øgning til 280 ◦C ved 5 ◦C/min og holdes 20 minutter. Injektionsporten blev indstillet til 280 ◦C i splitless-tilstand. Massedetektoren blev betjent i scanningstilstand (scanningsområde fra m/z 30-450).

Konklusion:
Som du kan se, er forberedelsen af prøverne ret enkel. Det kræver ikke dyre reagenser eller vanskelige manipulationer. Men denne procedure er meget vigtig for at opnå relevante analyseresultater.

 

[Cocojamba]

Hvad med andre GC-MS-systemer? Eller virker disse metoder kun med Agilent eller Thermo Scientific?

 

[G.Patton]

Nej, du kan faktisk bruge et hvilket som helst system med de samme specifikationer.