Βιομετασχηματισμός της βενζαλδεΰδης σε L-PAC

archae

Don't buy from me
Resident
Joined
Jan 25, 2022
Messages
77
Reaction score
66
Points
18
Εισαγωγή
Η L-φαινυλακετυλοκαρβινόλη είναι μια ένωση που χρησιμοποιείται στη σύνθεση της εφεδρίνης, η οποία η ίδια χρησιμοποιείται ως πρόδρομη ουσία των αμφεταμινών. Βιομηχανικά, συντίθεται με την αερόβια ζύμωση της βενζαλδεΰδης από μαγιά αρτοποιίας (S. cerevisiae/SC). Ενώ η διαδικασία είναι αρκετά απλή, μπορεί να απαιτεί λίγο εξοπλισμό και γνώσεις, ειδικά όταν μιλάμε για τη διατήρηση αποστειρωμένων καλλιεργειών και κατάλληλων συνθηκών ανάπτυξης. Επομένως, θα εξηγήσω δύο μεθόδους διαφορετικής πολυπλοκότητας για την παραγωγή L-PAC μέσω βιομετασχηματισμού. Το μέσο ανάπτυξης πρέπει να αποστειρώνεται με αυτόκαυστο πριν από τη χρήση.

Πρώτη μέθοδος:
Θα μπορούσε κανείς να περιγράψει αυτή την τεχνική ως "πρόχειρη αλλά εύκολη". Απαιτεί λιγότερο εξοπλισμό, είναι ευκολότερη, αλλά είναι επίσης λιγότερο αποτελεσματική και θα οδηγήσει σε χαμηλότερες αποδόσεις.

Διαδικασία:
Σε 500ml αποστειρωμένου ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικού άλατος 0,1M pH 6 προσθέστε 44g ζύμης και 55g γλυκόζης. Τοποθετήστε σε υδατόλουτρο θερμαινόμενο στους 30°C. Επώαση για 40/50 λεπτά.
Προσθέστε βενζαλδεΰδη (25 mmol) σε 5 ml αιθανόλης και ακεταλδεΰδη (25 mmol). Επώαση για 60 λεπτά.
Φιλτράρετε μέσω Celite.
Εκχυλίστε με 3*100 ml οξικού αιθυλεστέρα. Σπάστε το γαλάκτωμα χρησιμοποιώντας κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου, στεγνώστε πάνω σε άνυδρο θειικό νάτριο, διηθήστε, εξατμίστε το διαλύτη. Αυτό είναι το L-PAC σας.

Επεξηγήσεις:
Κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα: χρησιμοποιείται για τη διατήρηση σταθερού pH, καθώς η ανάπτυξη του κυττάρου θα το μειώσει με την πάροδο του χρόνου (όχι καλό). Για να προετοιμάσετε αυτό το ρυθμιστικό διάλυμα, ακολουθήστε τις διαδικασίες που δίνονται από αυτόν τον υπολογιστή: https://www.aatbio.com/resources/buffer-preparations-and-recipes/citrate-buffer-ph-3-to-6-2. Μην ξεχάσετε να αλλάξετε το pH σε 6.
Θερμοκρασία: επιτρέπει υψηλότερη μεταβολική δραστηριότητα της ζύμης.
Αιθανόλη: χρησιμοποιείται για τη διάλυση της βενζαλδεΰδης και της ακεταλδεΰδης και αυξάνει τη βιοδιαθεσιμότητά τους.
Ακεταλδεΰδη: χρησιμοποιείται ως δέκτης υδρογόνου αντί της βενζαλδεΰδης, περιορίζοντας έτσι την παραγωγή βενζυλικής αλκοόλης.

Πρόκειται για μια εύκολη διαδικασία που σχεδόν ο καθένας μπορεί να ακολουθήσει μετά από λίγο διάβασμα σχετικά με τις τυποποιημένες αποστειρωμένες τεχνικές, αλλά δίνει χαμηλότερες αποδόσεις από την άλλη (μεταξύ 20 και 40%). Μπορεί να βελτιωθεί είτε με καλύτερο αερισμό χρησιμοποιώντας είτε τροχιακή ανακίνηση στις 150 στροφές ανά λεπτό είτε με άντληση αποστειρωμένου αέρα στο μέσο, με 1L αέρα ανά λίτρο μέσου ανά λεπτό, είτε με ακινητοποίηση των κυττάρων σε αλγινικά σφαιρίδια. Μπορείτε να το αναζητήσετε αυτό στο youtube, είναι πολύ εύκολο να γίνει και μπορεί να αυξήσει σημαντικά τις αποδόσεις.


Δεύτερη μέθοδος:
Αυτό το πρωτόκολλο είναι πιο προχωρημένο, αλλά μπορεί να αυξήσει τις αποδόσεις έως και 60 ή 70% αν γίνει σωστά. Ωστόσο, θα απαιτήσει περισσότερο υλικό. Παρόλο που δεν είναι τέλειο, είναι πολύ καλύτερο.
Αυτή η μέθοδος σχεδιάστηκε για τον ζυμομύκητα Candida utilis αντί για τον S. cerevisiae. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε SC αντί αυτής, αλλά θα δείτε μείωση των αποδόσεων. Μπορείτε να αγοράσετε το C. utilis εδώ: https://www.biomall.in/product/candida-utilis-atcc-9950-0779p-0779p

Διαδικασία
Το μέσο ανάπτυξης αποτελείται από 10g/L ουρίας (φέρνει άζωτο), 10g/L MgSO4 (φέρνει μαγνήσιο και θείο) και από 50 έως 70g/L ζάχαρης χρησιμοποιώντας μελάσα. Διαλύεται σε επαρκή όγκο ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικών 0,1M pH 6.
Την προηγούμενη ημέρα, εμβολιάστε μια αρχική καλλιέργεια ζύμης και επωάστε στους 30°C κατά τη διάρκεια της νύχτας.
Μετρήστε την οπτική πυκνότητα (απορρόφηση) στα 595nm. Εμβολιάστε τον αντιδραστήρα ζύμωσης με 15% v/v της αρχικής σας καλλιέργειας προσαρμοσμένης σε 0,4 OD. Παράδειγμα: για να εμβολιάσετε ένα δοχείο 1L, εάν η OD μετρήθηκε σε 0,2, προσθέστε 300mL σε 700mL. Εάν η OD είναι ήδη στο 0,4, προσθέστε 150mL στα 850mL κ.λπ... (240x106 κύτταρα/ml στο εμβόλιο, βλέπε επεξηγήσεις)
Επώαση στους 30°C είτε με τροχιακή ανακίνηση στις 150 στροφές ανά λεπτό είτε με άντληση αποστειρωμένου αέρα με ρυθμό 1 v/v/min. Εάν αντλείτε αέρα, ίσως να θέλετε να προσθέσετε κάποια αργή ανάδευση.
Επωάστε μέχρι η OD να φτάσει μεταξύ 0,3 και 0,4. Αυτό θα πρέπει να διαρκέσει από 4 έως 6 ώρες, μπορεί να είναι λιγότερο ή περισσότερο. Ελέγχετε την OD κάθε 30 λεπτά μέχρι να φτάσετε στην επιθυμητή τιμή.
Η προσθήκη της βενζαλδεΰδης γίνεται σε πολλαπλές δόσεις. Για ένα 50mL, οι όγκοι είναι 68, 62, 56, 50, 43, 37, 31, 25. Προσθέστε ταυτόχρονα έναν ισοδύναμο όγκο ακεταλδεΰδης. Περιμένετε μία ώρα μεταξύ κάθε προσθήκης.
Εκχυλίστε χρησιμοποιώντας 1:2 τολουόλιο/μέσο v/v, εξατμίστε.

Επεξήγηση:
Οπτική πυκνότητα: μετράται με φασματοφωτόμετρο. Εδώ διαβάζουμε την απορρόφηση στα 595nm, η οποία είναι ανάλογη του αριθμού των κυττάρων στο διάλυμα. Ως γενικός κανόνας, θυμηθείτε 0,1 OD=60x10^6 κύτταρα/ml

Γενικές σημειώσεις:
Για τον αερισμό, σε μικρή κλίμακα η τροχιακή ανακίνηση στις 150 στροφές ανά λεπτό είναι καλύτερη. Σε μεγαλύτερη κλίμακα, θα χρειαστεί να κάνετε φυσαλίδες αέρα που περνάει από φίλτρο.
Στο δεύτερο πρωτόκολλο, η προσθήκη βενζαλδεΰδης γίνεται σε πολλαπλές δόσεις για να αυξηθούν οι αποδόσεις. Αυτό μπορεί να βελτιωθεί περαιτέρω με συνεχή έγχυση βενζαλδεΰδης με φθίνοντα ρυθμό, αλλά αυτό είναι περίπλοκο να γίνει σε ερασιτεχνικό περιβάλλον.
Μπορούν να χρησιµοποιηθούν υποκατεστηµένες βενζαλδεΰδες και να αποδώσουν το αντίστοιχο ανάλογο L-PAC.
Τέλος, μπορείτε να δανειστείτε ορισμένα στοιχεία της μεθόδου 2 και να τα ενσωματώσετε στη μέθοδο 1, προκειμένου να προσαρμόσετε τον πειραματικό σχεδιασμό στα μέτρα σας. Λάβετε υπόψη ότι μπορούν να χρησιμοποιηθούν και άλλα στελέχη και είδη, αυξάνοντας σημαντικά τις αποδόσεις. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στην ενότητα "Παραγωγή L-φαινυλοακετυλοκαρβινόλης (L-PAC) από διάφορα νέα στελέχη ζυμομυκήτων σε μελάσα και χυμό ζαχαροκάλαμου ως μέσο παραγωγής" των Ravi et al.
 

HerrHaber

Don't buy from me
Resident
Language
🇬🇧
Joined
Jan 15, 2023
Messages
567
Reaction score
309
Points
63
Ενδιαφέροντα
 

archae

Don't buy from me
Resident
Joined
Jan 25, 2022
Messages
77
Reaction score
66
Points
18
*Για μια καλλιέργεια 50mL
 

ace4cada

Don't buy from me
New Member
Joined
Mar 20, 2023
Messages
4
Reaction score
0
Points
1
Ποιο είναι το χρώμα του L-PAC; είναι λευκό ή κίτρινο... κάποιος είπε ότι είναι λευκό και στερεό...
(όταν εκχυλίζεται το L-PAC με διαλύτη (όπως το τολουόλιο), το σάκχαρο παραμένει στο διαλύτη.. και κατά την απόσταξη θα παραμείνει κίτρινο χρώμα..).
 

archae

Don't buy from me
Resident
Joined
Jan 25, 2022
Messages
77
Reaction score
66
Points
18
Η γλυκόζη, η φρουκτόζη και άλλα σάκχαρα δεν είναι διαλυτά σε μη πολικούς διαλύτες. Το L-PAC είναι κίτρινο ελαιώδες υγρό.
 
View previous replies…

ace4cada

Don't buy from me
New Member
Joined
Mar 20, 2023
Messages
4
Reaction score
0
Points
1
ευχαριστώ... αλλά
chat GPT λέει ότι είναι λευκό στερεό.
Κοιτάξτε το sullpiers(https://www.echemi.com/produce/pr2212011836-l-pac-99-powder-suc.html)
Έχω κάποιο κίτρινο υγρό... αλλά αμφιβάλλω αν είναι L-PAC...
(όταν αναμιγνύω Mosslass και νερό και τολουόλιο (χωρίς ζύμωση) και διαχωρίζω τολουόλιο, και στη συνέχεια απόσταξη.. κίτρινο υγρό παραμένει πάνω από 150 Κελσίου)
 
Last edited:

ace4cada

Don't buy from me
New Member
Joined
Mar 20, 2023
Messages
4
Reaction score
0
Points
1
και το σημείο τήξης είναι 152°C~156°C ( chat GPT και προμηθευτές όλα)
Αν είναι σωστό, πρέπει να είναι στερεό σε θερμοκρασία δωματίου.

 

archae

Don't buy from me
Resident
Joined
Jan 25, 2022
Messages
77
Reaction score
66
Points
18
Για όνομα του Θεού, παρακαλώ σταματήστε να χρησιμοποιείτε το ChatGPT για τη χημεία και τις επιστήμες γενικότερα. Υπάρχει η μηχανή αναζήτησης της google, πόσο πνευματικά τεμπέλης μπορεί να γίνει κανείς;
Το σημείο τήξης είναι περίπου 10°C για τη φαινυακετυλοκαρβινόλη.
Παρεμπιπτόντως, λέτε ότι απλά αναμειγνύετε μελάσα και νερό χωρίς ζύμωση; Το κίτρινο υγρό είναι απλά όλα τα οργανικά κεριά που περιέχονται στη μελάσα....
 

ace4cada

Don't buy from me
New Member
Joined
Mar 20, 2023
Messages
4
Reaction score
0
Points
1
ευχαριστώ... ξέρω ότι είναι δυνατόν από τη ζύμωση.. αλλά στο goolge εκτός από τη wikipedia δεν δίνουν σημείο τήξης . ακόμη και CheBi, Chemspider και ούτω καθεξής δεν παρέχουν σημείο τήξης.. όπως γνωρίζετε η wikipedia δεν είναι ακριβή δεδομένα (επειδή προσωπική μπορεί να επεξεργαστεί).. μόνο πιθανές πληροφορίες σχετικά με το σημείο τήξης είναι από τους προμηθευτές (παραπάνω σύνδεσμος)..

Απλά θέλω να ξέρω το ακριβές σημείο τήξης. και το χρώμα..
το sullpiers(99% L-PAC) είναι λάθος ή διαφορετική μορφή?
 

archae

Don't buy from me
Resident
Joined
Jan 25, 2022
Messages
77
Reaction score
66
Points
18
Μόλις το έλεγξα, πράγματι δεν μπορώ να βρω ακριβές σημείο τήξης. Ωστόσο, μπορώ να σας διαβεβαιώσω ότι σε θερμοκρασία δωματίου είναι ένα ελαιώδες υγρό, ακόμη και υπό συνθήκες ψύξης.

https://www.trc-canada.com/prod-img/MSDS/H949610MSDS.pdf

"Εμφάνιση: Άχρωμο έως ανοιχτό κίτρινο έλαιο"
 

Osmosis Vanderwaal

Moderator in US section
Resident
Joined
Jan 15, 2023
Messages
1,576
Solutions
4
Reaction score
1,095
Points
113
Deals
1
Ως πρώην καλλιεργητής μανιταριών, το σκέφτηκα πολύ αυτό. Σκέφτομαι ότι η μαγιά turbo, η οποία έχει όλα τα θρεπτικά συστατικά μέσα της και είναι ένα στέλεχος Sc ανθεκτικό στην αιθανόλη σε ποσοστό 20% θα ήταν ό,τι πρέπει για να επιβιώσει σε ένα εχθρικό περιβάλλον όπως αυτό
 

archae

Don't buy from me
Resident
Joined
Jan 25, 2022
Messages
77
Reaction score
66
Points
18
Αυτό που κάνω μερικές φορές για να αυξήσω την ποσότητα των θρεπτικών συστατικών στο μέσο μου είναι να προσθέσω λίγη σπιτική διατροφική μαγιά που φτιάχνω από χρησιμοποιημένη μαγιά ζυθοποιίας, καθώς περιέχει όλα τα θρεπτικά συστατικά που απαιτούνται για την υποστήριξη της ανάπτυξης των SC
 

Osmosis Vanderwaal

Moderator in US section
Resident
Joined
Jan 15, 2023
Messages
1,576
Solutions
4
Reaction score
1,095
Points
113
Deals
1
Είμαι επίσης οικιακός ζυθοποιός. Διάβασα για μια διαδικασία παρασκευής L-pac που δεν ήταν διαδικασία παρτίδας. Εφόσον η νεκρή μαγιά σας βυθίζεται,εκκενώνετε το βαρέλι σας μέσω ενός πετ-κοκ στο κάτω μέρος και οδηγείτε, ή φυγοκεντρίζετε τη νεκρή μαγιά και τα σκουπίδια από το υγρό και προσθέτετε περισσότερο πίσω στο βαρέλι και γίνεται μια συνεχής διαδικασία. Έκανα τα μαθηματικά, αλλά ξεχνάω πόσο υλικό αποφάσισα ότι θα κάνει μια εβδομάδα, 20γρ καθαρισμένου L-pac ανά 10 γαλόνια ls Αξίζει κάθε φορά που το στραγγίζεις νιώθω, και η φυσική επιλογή θα κάνει τη μαγιά όλο και καλύτερη στο να κάνει τη βιοχημεία όσο την κρατάς ζωντανή
 

kpspoo

Don't buy from me
New Member
Joined
Mar 24, 2023
Messages
3
Reaction score
1
Points
3
υπάρχουν πολλά υποπροϊόντα κατά τη ζύμωση.. όπως βενζυλική αλκοόλη, βενζοϊκό οξύ, αιθανόλη, οξικό οξύ, ακετοφαινόνη, βενζαλδεβύδη (μη αντιδρώντας)
Έτσι, για τον καθαρισμό της L-PAC από τον διαλύτη, απαιτείται πιο περίπλοκη διαδικασία.
και μερικά άρθρα συνιστούν αναερόβια κατάσταση για μεγαλύτερη απόδοση.
Νομίζω ότι η παραπάνω μέθοδος είναι κατευθυντήρια και όχι λεπτομερής.
 

kpspoo

Don't buy from me
New Member
Joined
Mar 24, 2023
Messages
3
Reaction score
1
Points
3
g
 
Last edited:

archae

Don't buy from me
Resident
Joined
Jan 25, 2022
Messages
77
Reaction score
66
Points
18
Η επεξεργασία δεν έχει περιγραφεί. Ωστόσο, η μόλυνση από το βενζοϊκό οξύ και τη βενζυλική αλκοόλη μπορεί να ελαχιστοποιηθεί με την προσθήκη ακεταλδεΰδης στο μείγμα της αντίδρασης, όπως περιγράφεται στη διαδικασία που έγραψα παραπάνω. Ενδιαφερόμουν περισσότερο για την παραγωγή παρά για τον καθαρισμό
 

kpspoo

Don't buy from me
New Member
Joined
Mar 24, 2023
Messages
3
Reaction score
1
Points
3
Κατάλαβα. χωρίς καθαρισμό κανείς δεν μπορεί να πείσει ότι το L-Pac παράχθηκε από ζύμωση. Το χρώμα μπορεί να είναι διαφορετικό από άλλα υποπροϊόντα. και η απόσταξη θα είναι πιο διφορούμενη λόγω των υποπροϊόντων.
Πώς μπορείτε να πείσετε ότι η L-PAC παράχθηκε; Έχετε αναλυτή;
 
Top