Περίληψη.
Η διεξαγωγή μελέτης των προφλεγμονωδών επιδράσεων της μεφεδρόνης και ο προσδιορισμός των ηθολογικών χαρακτηριστικών της αποτελούν υποχρεωτικό στάδιο στην έρευνα της 4-MMC, η οποία θεωρείται μία από τις πιο δημοφιλείς ψυχοδραστικές ουσίες όσον αφορά την ψυχαγωγική χρήση. Η χορήγηση, η μεταφορά και η συγκέντρωση της μεφεδρόνης στους ιστούς-στόχους της εξαρτάται όχι μόνο από τη χορηγούμενη δόση, αλλά και από διάφορους άλλους παράγοντες - την κατανομή της ουσίας, τον βαθμό και την ταχύτητα απορρόφησης, την πορεία του μεταβολισμού και της απέκκρισης. Καθ' όλη τη διάρκεια της μελέτης, είναι σημαντικό να προσδιοριστεί το ποσοστό της ουσίας που κατανέμεται στους ιστούς-στόχους ή στα βιολογικά υγρά με τα οποία μεταφέρεται, ώστε να διαπιστωθεί ποιο μέρος της χορηγούμενης ουσίας υφίσταται βιομετασχηματισμό και ποιο μέρος εισέρχεται στη συστηματική κυκλοφορία του αίματος αναλλοίωτο. Επίσης, στο στάδιο των προκλινικών δοκιμών, εκτός από τη μελέτη των κύριων μηχανισμών δράσης, υπάρχει ανάγκη για μια μεγάλη φαινοτυπική διαλογή, απαραίτητη για την εις βάθος κατανόηση της φαρμακοδυναμικής και των παρενεργειών της ουσίας. Μία από τις σημαντικές πτυχές αυτού του ελέγχου είναι η μελέτη των ψυχοδραστικών ιδιοτήτων της ουσίας.
Στόχοι της μελέτης.
1. Προσδιορισμός των γνωστικών κινήτρων και των προτύπων συμπεριφοράς σε αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκε 4-μεθυλομεθκαθηνόνη.
2. Μελέτη της ενδοθηλιακής λειτουργίας με τη διεξαγωγή αγγειακών φαρμακολογικών δοκιμών με αποκλεισμό της σύνθεσης του ΝΟ υπό υπερηχογραφικό έλεγχο της ταχύτητας ροής του αίματος στη μηριαία αρτηρία αρουραίου και παρακολούθηση με ροομετρία λέιζερ Doppler της γενικής αιμοδυναμικής και της ταχύτητας της μικροκυκλοφορίας στο μέσο μυ.
3. Προσδιορισμός και αξιολόγηση των προφλεγμονωδών και ανοσορυθμιστικών δραστηριοτήτων της 4-μεθυλομεθκαθηνόνης με τη χρήση του μοντέλου οιδήματος του ποδιού που προκαλείται από φορμαλίνη και της δοκιμασίας NBT.
Υλικά και μέθοδοι.
Η μελέτη διεξήχθη σε 40 αρσενικούς αρουραίους Wistar βάρους 180-200 g. Προσδιορίστηκαν 4 ομάδες: 1) Ομάδα ελέγχου (άθικτοι αρουραίοι). 2) Αρουραίοι, στους οποίους χορηγήθηκε μεφεδρόνη ενδοπεριτοναϊκά κάθε 48 ώρες σε δόση 5 mg/kg διαλυμένη σε διάλυμα NaCl 0,9 (0,5 ml). 3) Αρουραίοι, στους οποίους χορηγήθηκε μεφεδρόνη από το στόμα (μέσω σωλήνα) κάθε 48 ώρες σε δόση 5 mg/kg διαλυμένη σε διάλυμα NaCl 0,9 (0,5 ml). 4) Αρουραίοι, στους οποίους χορηγήθηκε μεφεδρόνη ενδοπεριτοναϊκά κάθε 48 ώρες σε δόση 5 mg/kg διαλυμένη σε διάλυμα NaCl 0,9 (0,5 ml) πριν από τη χορήγηση φορμαλίνης για το μοντέλο οίδημα των ποδιών που προκαλείται από φορμαλίνη.
Περιγραφή και συζήτηση της μελέτης.
Προσδιορισμός των γνωστικών κινήτρων και των προτύπων συμπεριφοράς σε αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκε 4-μεθυλομεθκαθηνόνη. Για την επίτευξη αυτού του στόχου διατυπώθηκαν οι ακόλουθοι στόχοι: Αξιολόγηση της επίδρασης της 4-μεθυλομεθκαθηνόνης στο επίπεδο διέγερσης, άγχους και αντίστασης στο στρες σε αρουραίους. Για τον προσδιορισμό της ψυχοσυναισθηματικής κατάστασης των υπό μελέτη ζώων, χρησιμοποιήσαμε ένα αναβαθμισμένο πρωτόκολλο δοκιμής Hall, το οποίο περιλαμβάνει την τοποθέτηση ενός αντικειμένου σε μια τυποποιημένη αρένα και την καταγραφή δεικτών δραστηριότητας με τη χρήση του συγκροτήματος λογισμικού και υλικού PANLAB Harvard Apparatus. Ως μονάδες αξιολόγησης επιλέχθηκαν οι διακριτές πράξεις συμπεριφοράς που καταγράφηκαν με τη χρήση του συγκροτήματος λογισμικού και υλικού.
Η μελέτη διεξήχθη σε 30 αρουραίους (ομάδα 1, 2 και 3 αντίστοιχα). Πριν από το πείραμα, τα ζώα διατηρούνταν σε εργαστηριακό vivarium 10 ατόμων σε ένα κλουβί, με μη μετατρεπόμενο 12ωρο πρόγραμμα, σε θερμοκρασία δωματίου 22-24 °C και υγρασία 60%, με τυποποιημένη διατροφή. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν το καλοκαίρι. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν ελέγχθηκαν ως προς την κανονικότητα της κατανομής με το κριτήριο Shapiro-Wilk και επεξεργάστηκαν με μεθόδους μεταβλητής στατιστικής με το t-test του Student και το πακέτο λογισμικού STATISTICA. Στο σχήμα παρουσιάζεται σχηματικά ο σχεδιασμός του πειράματος. Για την αξιολόγηση της εξερευνητικής συμπεριφοράς καταγράφηκαν η οριζόντια δραστηριότητα, η αντίδραση περιποίησης, η δραστηριότητα αναζήτησης, η κινητική δραστηριότητα, η ούρηση και η αφόδευση. Το πείραμα διεξήχθη σε σκοτεινό δωμάτιο, απομονωμένο από τους εξωτερικούς θορύβους και το ηλιακό φως, σε διάστημα από 10 έως 14 ώρες. Το ανοιχτό πεδίο ήταν μια τετράγωνη περιοχή μεγέθους 150x150 cm με πλευρές ύψους 30 cm. Η θερμοκρασία στο δωμάτιο διατηρήθηκε στους 23 βαθμούς Κελσίου. Μετά από κάθε ζώο, το ανοιχτό πεδίο απολυμαίνονταν για απόσμηση. Πριν από τη μελέτη κάθε ομάδας, ένα ζώο μηδέν απελευθερώθηκε στο ανοιχτό πεδίο.
Την 21η ημέρα, οι αρουραίοι απομακρύνθηκαν από το πείραμα. Μετά την αναισθησία των αρουραίων, πραγματοποιήθηκε απομόνωση της δεξιάς καρωτιδικής αρτηρίας σε σταθερή πλατφόρμα, αποκαλύφθηκε ο μέσος μηριαίος μυς και καθετηριάστηκε η αριστερή μηριαία φλέβα. Η πολυσύνθετη μελέτη των αιμοδυναμικών παραμέτρων διερευνήθηκε με τη μέθοδο των εξειδικευμένων δοκιμασιών πρόκλησης που περιλάμβαναν τη χορήγηση ακετυλοχολίνης και νιτροπρωσσικού νατρίου (ΝΟ) στον μηριαίο καθετήρα. Οι παράμετροι (συστολική αρτηριακή πίεση, διαστολική αρτηριακή πίεση, καρδιακή συχνότητα) καταγράφηκαν με τη χρήση αισθητήρα TDS. Ο αισθητήρας εγκαταστάθηκε πάνω από το μεσαίο τρίτο της δεξιάς μηριαίας αρτηρίας και καταγράφηκαν οι ακόλουθοι δείκτες: μέγιστη συστολική (VS) και διαστολική (VD) ταχύτητα, μέση (QAs) και ογκομετρική (QAM) ταχύτητα ροής αίματος, δείκτης παλμού (PL, Gosling index) και δείκτης αντίστασης (RI, Pourcelot index). Για τη μέτρηση της ταχύτητας των αιμοκυττάρων στα αγγεία της μικροκυκλοφορικής κλίνης χρησιμοποιήθηκε ένας αισθητήρας-ανιχνευτής σε σχήμα βελόνας, ο οποίος τοποθετήθηκε στο κάτω τρίτο τμήμα του μέσου πλατύ μηριαίου μυός. Οι αγγειοδραστικοί παράγοντες (ακετυλοχολίνη - 40 mcg/kg, νιτροπρωσσικό νάτριο - 30 mcg/kg) χορηγήθηκαν διαδοχικά μέσω καθετήρα που εισήχθη στην αριστερή μηριαία φλέβα ανά διαστήματα 15 λεπτών. Έτσι, υπήρχε η δυνατότητα παράλληλης παρακολούθησης των αιμοδυναμικών παραμέτρων και των παραμέτρων της μικροκυκλοφορίας σε ένα σύστημα τριών επιπέδων (κεντρική κυκλοφορία - ελαστικό αγγειακό σύστημα - περιφερικό αγγειακό σύστημα). Η στατιστική επεξεργασία των αποτελεσμάτων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού STATISTICA 10. Στη συνέχεια υπολογίστηκε ο συντελεστής ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας (QED). Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του Spearman's rank test, ο υπολογισμός της αξιοπιστίας μεταξύ των ομάδων έγινε με τη χρήση του παραμετρικού t-test του Student.
Τα διαγράμματα που παρουσιάστηκαν δείχνουν ότι η επίδραση της μεφεδρόνης στη συμπεριφορά των ζώων αντιστοιχεί στις κύριες επιδράσεις της, που σχετίζονται με τον γνωστό μηχανισμό δράσης της. Έτσι, το διάγραμμα 1 απεικονίζει μια σημαντική αύξηση της οριζόντιας κινητικής δραστηριότητας σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Το διάγραμμα 2 δείχνει ότι οι πράξεις περιποίησης μειώνονται σημαντικά. Το φαινόμενο αυτό προκαλείται από τη μείωση της επιρροής των κινήτρων σε σχέση με την παρούσα ανάγκη. Το διάγραμμα 3 απεικονίζει με σαφήνεια την αύξηση των πράξεων αφόδευσης και ούρησης, η οποία αποτελεί μία από τις συχνές επιδράσεις της πρόσληψης 4-mmc. Η αύξηση της οριζόντιας δραστηριότητας μπορεί να υποδηλώνει αγχολυτικά, αγχογόνα, ταραχογόνα αποτελέσματα ή αύξηση της κινητικής δραστηριότητας χωρίς συναισθηματική συνιστώσα (κινητική διέγερση). Οι αντιδράσεις περιποίησης μπορούν επίσης να ερμηνευθούν διφορούμενα, καθώς η συχνότητα των πράξεων περιποίησης αυξάνεται τόσο σε αγχωτικό όσο και σε ευνοϊκό περιβάλλον. Οι εκδηλώσεις της εξερευνητικής δραστηριότητας, καθώς και η συχνότητα των ούρων και των αφόδευσης, μπορούν να ερμηνευθούν με μεγαλύτερη σαφήνεια. Χρησιμοποιώντας αυτόν τον αλγόριθμο, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι η φαρμακοδυναμική επίδραση όσον αφορά την υψηλότερη νευρική δραστηριότητα μπορεί να ερμηνευθεί ως κινητική διέγερση με συναισθηματική συνιστώσα.
Η ομάδα ελέγχου επέδειξε τον ίδιο τύπο αντιδράσεων στην εισαγωγή ACH και ΝΟ, οι οποίες εκδηλώθηκαν ως πτώση της συστολικής, διαστολικής και μέσης αρτηριακής πίεσης, μείωση της γραμμικής ταχύτητας της μικροκυκλοφορίας, καθώς και της διαστολικής ταχύτητας κίνησης του αίματος στη μηριαία αρτηρία (εφεξής FA), (δείκτες δεδομένων - Vd, Vad)- 2) αύξηση της συστολικής ταχύτητας κίνησης του αίματος στη FA (VS, Vas), των δεικτών Purcello και Gosling. Οι παράμετροι επέστρεψαν στις αρχικές τους τιμές εντός 2 λεπτών.
Πραγματοποιήθηκε περαιτέρω στατιστική επεξεργασία κατά τον προσδιορισμό ενός αριθμού τιμών με την πάροδο του χρόνου για κάθε δείγμα, οι οποίες εκφράστηκαν ως ποσοστό. Το κριτήριο Spearman, το οποίο χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση, έδειξε την καλύτερη έκφραση της αναγκαίας διαφοράς σε στατιστικά σημαντικές παραμέτρους. Ο μεγαλύτερος βαθμός συσχέτισης (p<0,05) προσδιορίστηκε μεταξύ του δείκτη της μέσης αρτηριακής πίεσης (εφεξής MAD), της γραμμικής ταχύτητας της μικροκυκλοφορίας, της συστολικής ταχύτητας και της διαφοράς συστολικής-διαστολικής ταχύτητας στη μηριαία αρτηρία. Άλλες υπερηχογραφικές παράμετροι έδειξαν χαμηλή και λιγότερο αξιόπιστη συσχέτιση με τη δυναμική της αρτηριακής πίεσης και την ταχύτητα της μικροκυκλοφορίας. Η μελέτη της από του στόματος χορηγούμενης 4-mmc αποκάλυψε στατιστικά σημαντική αύξηση των δεικτών SAD, DAD και του συντελεστή ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας (QED) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Οι δείκτες της μέγιστης συστολικής (VS) και της μέγιστης διαστολικής ταχύτητας (VD) μειώνονται σημαντικά κατά τη διάρκεια των δοκιμασιών πρόκλησης σε αρουραίους της ομάδας 3, στην οποία χορηγήθηκε από το στόμα μεφεδρόνη.
Η αποτελεσματικότητα των ενδοθηλιοεξαρτώμενων παραγόντων χαλάρωσης που απελευθερώνονται και ενεργοποιούνται με τη χορήγηση ακετυλοχολίνης μειώνεται ποσοτικά και ποιοτικά. Η μεσολαβούμενη από το ΝΟ επίδραση σε απόκριση στη δοκιμασία πρόκλησης ACH μειώνεται, λόγω της αρνητικής επίδρασης της 4-mmc στην παραγωγή και έκφραση τόσο του παράγοντα αυτού όσο και στη δραστηριότητα της γουανυλικής κυκλάσης. Η επαγόμενη από την ACH ενδοθηλιοεξαρτώμενη χαλάρωση των μικροκυκλοφορικών αγγείων, η οποία μεσολαβεί μέσω των μουσκαρινικών υποδοχέων, διαταράσσεται επίσης λόγω του εκφυλισμού της δραστηριότητας των υποδοχέων, καθώς και λόγω της μείωσης της πυκνότητας των υποδοχέων στην επιφάνεια των ενδοθηλιοκυττάρων. Είναι πιθανό ότι ο μηχανισμός μείωσης της μεσολαβούμενης από το ενδοθήλιο αντίδρασης που εξαρτάται από την ACH ως απόκριση στη χρήση μεφεδρόνης προκαλείται από τη σημαντική αύξηση του σχηματισμού ελεύθερων ριζών (τόσο υπεροξειδίου όσο και υδροξυλίου) στην υποξική κατάσταση του κυττάρου, οι οποίες αλληλεπιδρούν με το NO2 και το NO3.
Υπήρξε στατιστικά σημαντική μείωση της μεταβολικής δραστηριότητας των ουδετερόφιλων κατά 38,4 % (Me = 13,1 με διατεταρτημοριακό εύρος από 10,3 έως 15,9 με διαφορά 5,3 σε p=0,002- z = 3,008) σε σύγκριση με τους δείκτες της ομάδας ελέγχου. Στη μελέτη της ικανότητας απορρόφησης της φαγοκυττάρωσης με την προσθήκη λατέξ, οι δείκτες αυξήθηκαν από 13,1 Me σε 16,5 Me, με ποσοστιαία αύξηση 18,2 % για την ομάδα 3 (ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση), ωστόσο η ποσοστιαία διαφορά σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου είναι 18,0 %, γεγονός που αποτελεί σημαντική και στατιστικά αξιόπιστη ένδειξη ανοσοκατασταλτικής δράσης. Επίσης, διαπιστώθηκε στατιστικά σημαντική μείωση της αυθόρμητης φαγοκυττάρωσης στην Ομάδα 3, η οποία μειώθηκε κατά 25,3% (σε p>0,0001, z=2,84) σε σύγκριση με τα άθικτα ζώα.
Η διεξαγωγή μελέτης των προφλεγμονωδών επιδράσεων της μεφεδρόνης και ο προσδιορισμός των ηθολογικών χαρακτηριστικών της αποτελούν υποχρεωτικό στάδιο στην έρευνα της 4-MMC, η οποία θεωρείται μία από τις πιο δημοφιλείς ψυχοδραστικές ουσίες όσον αφορά την ψυχαγωγική χρήση. Η χορήγηση, η μεταφορά και η συγκέντρωση της μεφεδρόνης στους ιστούς-στόχους της εξαρτάται όχι μόνο από τη χορηγούμενη δόση, αλλά και από διάφορους άλλους παράγοντες - την κατανομή της ουσίας, τον βαθμό και την ταχύτητα απορρόφησης, την πορεία του μεταβολισμού και της απέκκρισης. Καθ' όλη τη διάρκεια της μελέτης, είναι σημαντικό να προσδιοριστεί το ποσοστό της ουσίας που κατανέμεται στους ιστούς-στόχους ή στα βιολογικά υγρά με τα οποία μεταφέρεται, ώστε να διαπιστωθεί ποιο μέρος της χορηγούμενης ουσίας υφίσταται βιομετασχηματισμό και ποιο μέρος εισέρχεται στη συστηματική κυκλοφορία του αίματος αναλλοίωτο. Επίσης, στο στάδιο των προκλινικών δοκιμών, εκτός από τη μελέτη των κύριων μηχανισμών δράσης, υπάρχει ανάγκη για μια μεγάλη φαινοτυπική διαλογή, απαραίτητη για την εις βάθος κατανόηση της φαρμακοδυναμικής και των παρενεργειών της ουσίας. Μία από τις σημαντικές πτυχές αυτού του ελέγχου είναι η μελέτη των ψυχοδραστικών ιδιοτήτων της ουσίας.
Στόχοι της μελέτης.
1. Προσδιορισμός των γνωστικών κινήτρων και των προτύπων συμπεριφοράς σε αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκε 4-μεθυλομεθκαθηνόνη.
2. Μελέτη της ενδοθηλιακής λειτουργίας με τη διεξαγωγή αγγειακών φαρμακολογικών δοκιμών με αποκλεισμό της σύνθεσης του ΝΟ υπό υπερηχογραφικό έλεγχο της ταχύτητας ροής του αίματος στη μηριαία αρτηρία αρουραίου και παρακολούθηση με ροομετρία λέιζερ Doppler της γενικής αιμοδυναμικής και της ταχύτητας της μικροκυκλοφορίας στο μέσο μυ.
3. Προσδιορισμός και αξιολόγηση των προφλεγμονωδών και ανοσορυθμιστικών δραστηριοτήτων της 4-μεθυλομεθκαθηνόνης με τη χρήση του μοντέλου οιδήματος του ποδιού που προκαλείται από φορμαλίνη και της δοκιμασίας NBT.
Υλικά και μέθοδοι.
Η μελέτη διεξήχθη σε 40 αρσενικούς αρουραίους Wistar βάρους 180-200 g. Προσδιορίστηκαν 4 ομάδες: 1) Ομάδα ελέγχου (άθικτοι αρουραίοι). 2) Αρουραίοι, στους οποίους χορηγήθηκε μεφεδρόνη ενδοπεριτοναϊκά κάθε 48 ώρες σε δόση 5 mg/kg διαλυμένη σε διάλυμα NaCl 0,9 (0,5 ml). 3) Αρουραίοι, στους οποίους χορηγήθηκε μεφεδρόνη από το στόμα (μέσω σωλήνα) κάθε 48 ώρες σε δόση 5 mg/kg διαλυμένη σε διάλυμα NaCl 0,9 (0,5 ml). 4) Αρουραίοι, στους οποίους χορηγήθηκε μεφεδρόνη ενδοπεριτοναϊκά κάθε 48 ώρες σε δόση 5 mg/kg διαλυμένη σε διάλυμα NaCl 0,9 (0,5 ml) πριν από τη χορήγηση φορμαλίνης για το μοντέλο οίδημα των ποδιών που προκαλείται από φορμαλίνη.
Περιγραφή και συζήτηση της μελέτης.
Προσδιορισμός των γνωστικών κινήτρων και των προτύπων συμπεριφοράς σε αρουραίους στους οποίους χορηγήθηκε 4-μεθυλομεθκαθηνόνη. Για την επίτευξη αυτού του στόχου διατυπώθηκαν οι ακόλουθοι στόχοι: Αξιολόγηση της επίδρασης της 4-μεθυλομεθκαθηνόνης στο επίπεδο διέγερσης, άγχους και αντίστασης στο στρες σε αρουραίους. Για τον προσδιορισμό της ψυχοσυναισθηματικής κατάστασης των υπό μελέτη ζώων, χρησιμοποιήσαμε ένα αναβαθμισμένο πρωτόκολλο δοκιμής Hall, το οποίο περιλαμβάνει την τοποθέτηση ενός αντικειμένου σε μια τυποποιημένη αρένα και την καταγραφή δεικτών δραστηριότητας με τη χρήση του συγκροτήματος λογισμικού και υλικού PANLAB Harvard Apparatus. Ως μονάδες αξιολόγησης επιλέχθηκαν οι διακριτές πράξεις συμπεριφοράς που καταγράφηκαν με τη χρήση του συγκροτήματος λογισμικού και υλικού.
Η μελέτη διεξήχθη σε 30 αρουραίους (ομάδα 1, 2 και 3 αντίστοιχα). Πριν από το πείραμα, τα ζώα διατηρούνταν σε εργαστηριακό vivarium 10 ατόμων σε ένα κλουβί, με μη μετατρεπόμενο 12ωρο πρόγραμμα, σε θερμοκρασία δωματίου 22-24 °C και υγρασία 60%, με τυποποιημένη διατροφή. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν το καλοκαίρι. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν ελέγχθηκαν ως προς την κανονικότητα της κατανομής με το κριτήριο Shapiro-Wilk και επεξεργάστηκαν με μεθόδους μεταβλητής στατιστικής με το t-test του Student και το πακέτο λογισμικού STATISTICA. Στο σχήμα παρουσιάζεται σχηματικά ο σχεδιασμός του πειράματος. Για την αξιολόγηση της εξερευνητικής συμπεριφοράς καταγράφηκαν η οριζόντια δραστηριότητα, η αντίδραση περιποίησης, η δραστηριότητα αναζήτησης, η κινητική δραστηριότητα, η ούρηση και η αφόδευση. Το πείραμα διεξήχθη σε σκοτεινό δωμάτιο, απομονωμένο από τους εξωτερικούς θορύβους και το ηλιακό φως, σε διάστημα από 10 έως 14 ώρες. Το ανοιχτό πεδίο ήταν μια τετράγωνη περιοχή μεγέθους 150x150 cm με πλευρές ύψους 30 cm. Η θερμοκρασία στο δωμάτιο διατηρήθηκε στους 23 βαθμούς Κελσίου. Μετά από κάθε ζώο, το ανοιχτό πεδίο απολυμαίνονταν για απόσμηση. Πριν από τη μελέτη κάθε ομάδας, ένα ζώο μηδέν απελευθερώθηκε στο ανοιχτό πεδίο.
Την 21η ημέρα, οι αρουραίοι απομακρύνθηκαν από το πείραμα. Μετά την αναισθησία των αρουραίων, πραγματοποιήθηκε απομόνωση της δεξιάς καρωτιδικής αρτηρίας σε σταθερή πλατφόρμα, αποκαλύφθηκε ο μέσος μηριαίος μυς και καθετηριάστηκε η αριστερή μηριαία φλέβα. Η πολυσύνθετη μελέτη των αιμοδυναμικών παραμέτρων διερευνήθηκε με τη μέθοδο των εξειδικευμένων δοκιμασιών πρόκλησης που περιλάμβαναν τη χορήγηση ακετυλοχολίνης και νιτροπρωσσικού νατρίου (ΝΟ) στον μηριαίο καθετήρα. Οι παράμετροι (συστολική αρτηριακή πίεση, διαστολική αρτηριακή πίεση, καρδιακή συχνότητα) καταγράφηκαν με τη χρήση αισθητήρα TDS. Ο αισθητήρας εγκαταστάθηκε πάνω από το μεσαίο τρίτο της δεξιάς μηριαίας αρτηρίας και καταγράφηκαν οι ακόλουθοι δείκτες: μέγιστη συστολική (VS) και διαστολική (VD) ταχύτητα, μέση (QAs) και ογκομετρική (QAM) ταχύτητα ροής αίματος, δείκτης παλμού (PL, Gosling index) και δείκτης αντίστασης (RI, Pourcelot index). Για τη μέτρηση της ταχύτητας των αιμοκυττάρων στα αγγεία της μικροκυκλοφορικής κλίνης χρησιμοποιήθηκε ένας αισθητήρας-ανιχνευτής σε σχήμα βελόνας, ο οποίος τοποθετήθηκε στο κάτω τρίτο τμήμα του μέσου πλατύ μηριαίου μυός. Οι αγγειοδραστικοί παράγοντες (ακετυλοχολίνη - 40 mcg/kg, νιτροπρωσσικό νάτριο - 30 mcg/kg) χορηγήθηκαν διαδοχικά μέσω καθετήρα που εισήχθη στην αριστερή μηριαία φλέβα ανά διαστήματα 15 λεπτών. Έτσι, υπήρχε η δυνατότητα παράλληλης παρακολούθησης των αιμοδυναμικών παραμέτρων και των παραμέτρων της μικροκυκλοφορίας σε ένα σύστημα τριών επιπέδων (κεντρική κυκλοφορία - ελαστικό αγγειακό σύστημα - περιφερικό αγγειακό σύστημα). Η στατιστική επεξεργασία των αποτελεσμάτων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού STATISTICA 10. Στη συνέχεια υπολογίστηκε ο συντελεστής ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας (QED). Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του Spearman's rank test, ο υπολογισμός της αξιοπιστίας μεταξύ των ομάδων έγινε με τη χρήση του παραμετρικού t-test του Student.
Τα διαγράμματα που παρουσιάστηκαν δείχνουν ότι η επίδραση της μεφεδρόνης στη συμπεριφορά των ζώων αντιστοιχεί στις κύριες επιδράσεις της, που σχετίζονται με τον γνωστό μηχανισμό δράσης της. Έτσι, το διάγραμμα 1 απεικονίζει μια σημαντική αύξηση της οριζόντιας κινητικής δραστηριότητας σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Το διάγραμμα 2 δείχνει ότι οι πράξεις περιποίησης μειώνονται σημαντικά. Το φαινόμενο αυτό προκαλείται από τη μείωση της επιρροής των κινήτρων σε σχέση με την παρούσα ανάγκη. Το διάγραμμα 3 απεικονίζει με σαφήνεια την αύξηση των πράξεων αφόδευσης και ούρησης, η οποία αποτελεί μία από τις συχνές επιδράσεις της πρόσληψης 4-mmc. Η αύξηση της οριζόντιας δραστηριότητας μπορεί να υποδηλώνει αγχολυτικά, αγχογόνα, ταραχογόνα αποτελέσματα ή αύξηση της κινητικής δραστηριότητας χωρίς συναισθηματική συνιστώσα (κινητική διέγερση). Οι αντιδράσεις περιποίησης μπορούν επίσης να ερμηνευθούν διφορούμενα, καθώς η συχνότητα των πράξεων περιποίησης αυξάνεται τόσο σε αγχωτικό όσο και σε ευνοϊκό περιβάλλον. Οι εκδηλώσεις της εξερευνητικής δραστηριότητας, καθώς και η συχνότητα των ούρων και των αφόδευσης, μπορούν να ερμηνευθούν με μεγαλύτερη σαφήνεια. Χρησιμοποιώντας αυτόν τον αλγόριθμο, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι η φαρμακοδυναμική επίδραση όσον αφορά την υψηλότερη νευρική δραστηριότητα μπορεί να ερμηνευθεί ως κινητική διέγερση με συναισθηματική συνιστώσα.
Η ομάδα ελέγχου επέδειξε τον ίδιο τύπο αντιδράσεων στην εισαγωγή ACH και ΝΟ, οι οποίες εκδηλώθηκαν ως πτώση της συστολικής, διαστολικής και μέσης αρτηριακής πίεσης, μείωση της γραμμικής ταχύτητας της μικροκυκλοφορίας, καθώς και της διαστολικής ταχύτητας κίνησης του αίματος στη μηριαία αρτηρία (εφεξής FA), (δείκτες δεδομένων - Vd, Vad)- 2) αύξηση της συστολικής ταχύτητας κίνησης του αίματος στη FA (VS, Vas), των δεικτών Purcello και Gosling. Οι παράμετροι επέστρεψαν στις αρχικές τους τιμές εντός 2 λεπτών.
Πραγματοποιήθηκε περαιτέρω στατιστική επεξεργασία κατά τον προσδιορισμό ενός αριθμού τιμών με την πάροδο του χρόνου για κάθε δείγμα, οι οποίες εκφράστηκαν ως ποσοστό. Το κριτήριο Spearman, το οποίο χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση, έδειξε την καλύτερη έκφραση της αναγκαίας διαφοράς σε στατιστικά σημαντικές παραμέτρους. Ο μεγαλύτερος βαθμός συσχέτισης (p<0,05) προσδιορίστηκε μεταξύ του δείκτη της μέσης αρτηριακής πίεσης (εφεξής MAD), της γραμμικής ταχύτητας της μικροκυκλοφορίας, της συστολικής ταχύτητας και της διαφοράς συστολικής-διαστολικής ταχύτητας στη μηριαία αρτηρία. Άλλες υπερηχογραφικές παράμετροι έδειξαν χαμηλή και λιγότερο αξιόπιστη συσχέτιση με τη δυναμική της αρτηριακής πίεσης και την ταχύτητα της μικροκυκλοφορίας. Η μελέτη της από του στόματος χορηγούμενης 4-mmc αποκάλυψε στατιστικά σημαντική αύξηση των δεικτών SAD, DAD και του συντελεστή ενδοθηλιακής δυσλειτουργίας (QED) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Οι δείκτες της μέγιστης συστολικής (VS) και της μέγιστης διαστολικής ταχύτητας (VD) μειώνονται σημαντικά κατά τη διάρκεια των δοκιμασιών πρόκλησης σε αρουραίους της ομάδας 3, στην οποία χορηγήθηκε από το στόμα μεφεδρόνη.
Η αποτελεσματικότητα των ενδοθηλιοεξαρτώμενων παραγόντων χαλάρωσης που απελευθερώνονται και ενεργοποιούνται με τη χορήγηση ακετυλοχολίνης μειώνεται ποσοτικά και ποιοτικά. Η μεσολαβούμενη από το ΝΟ επίδραση σε απόκριση στη δοκιμασία πρόκλησης ACH μειώνεται, λόγω της αρνητικής επίδρασης της 4-mmc στην παραγωγή και έκφραση τόσο του παράγοντα αυτού όσο και στη δραστηριότητα της γουανυλικής κυκλάσης. Η επαγόμενη από την ACH ενδοθηλιοεξαρτώμενη χαλάρωση των μικροκυκλοφορικών αγγείων, η οποία μεσολαβεί μέσω των μουσκαρινικών υποδοχέων, διαταράσσεται επίσης λόγω του εκφυλισμού της δραστηριότητας των υποδοχέων, καθώς και λόγω της μείωσης της πυκνότητας των υποδοχέων στην επιφάνεια των ενδοθηλιοκυττάρων. Είναι πιθανό ότι ο μηχανισμός μείωσης της μεσολαβούμενης από το ενδοθήλιο αντίδρασης που εξαρτάται από την ACH ως απόκριση στη χρήση μεφεδρόνης προκαλείται από τη σημαντική αύξηση του σχηματισμού ελεύθερων ριζών (τόσο υπεροξειδίου όσο και υδροξυλίου) στην υποξική κατάσταση του κυττάρου, οι οποίες αλληλεπιδρούν με το NO2 και το NO3.
Υπήρξε στατιστικά σημαντική μείωση της μεταβολικής δραστηριότητας των ουδετερόφιλων κατά 38,4 % (Me = 13,1 με διατεταρτημοριακό εύρος από 10,3 έως 15,9 με διαφορά 5,3 σε p=0,002- z = 3,008) σε σύγκριση με τους δείκτες της ομάδας ελέγχου. Στη μελέτη της ικανότητας απορρόφησης της φαγοκυττάρωσης με την προσθήκη λατέξ, οι δείκτες αυξήθηκαν από 13,1 Me σε 16,5 Me, με ποσοστιαία αύξηση 18,2 % για την ομάδα 3 (ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση), ωστόσο η ποσοστιαία διαφορά σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου είναι 18,0 %, γεγονός που αποτελεί σημαντική και στατιστικά αξιόπιστη ένδειξη ανοσοκατασταλτικής δράσης. Επίσης, διαπιστώθηκε στατιστικά σημαντική μείωση της αυθόρμητης φαγοκυττάρωσης στην Ομάδα 3, η οποία μειώθηκε κατά 25,3% (σε p>0,0001, z=2,84) σε σύγκριση με τα άθικτα ζώα.
- Όταν χορηγήθηκε μεφεδρόνη στα πειραματόζωα, καταγράφηκε στατιστικά σημαντική αλλαγή στις αναλυόμενες συμπεριφορικές πράξεις. Το γεγονός αυτό υποδεικνύει την παρουσία συγκεκριμένης ψυχοτρόπου δράσης της εν λόγω ένωσης που συνδέεται με υπερβολικά αυξημένα επίπεδα διέγερσης και άγχους, ωστόσο, με μειωμένη αντοχή στο στρες. Έτσι, τα αποτελέσματα της μελέτης σε αυτό το στάδιο διεύρυναν τις πληροφορίες σχετικά με το προφίλ της δράσης της ένωσης. Οι παρατηρούμενες ψυχοτροπικές επιδράσεις του 4-mmc εμβαθύνουν την κατανόηση της φαρμακολογικής του δράσης και θα πρέπει να αποτελέσουν αντικείμενο περαιτέρω μελέτης.
- Οι επίμονα αυξημένες παράμετροι της αρτηριακής πίεσης στις αρχικές καταστάσεις των αρουραίων της ομάδας 3 (μεφεδρόνη), καθώς και οι σχετικοί δείκτες τους μετά από δοκιμασίες πρόκλησης, προκαλούνται από διαταραχή όχι μόνο στην έκφραση του ΝΟ (ένας από τους κύριους αγγειοδιασταλτικούς παράγοντες που ρυθμίζουν το έργο των μικροκυκλοφορικών αγγείων), αλλά και των προστακυκλινών και των παραγόντων ενδοθηλιακής υπερπόλωσης (EDHF). Τα αποτελέσματα της μελέτης σε αυτό το στάδιο επιβεβαίωσαν τη θεωρητική υπόθεση σχετικά με την υπερβολική αρνητική επίδραση της μεφεδρόνης τόσο στο ενδοθήλιο των μικροκυκλοφορικών αγγείων όσο και στη βιωσιμότητα του καρδιαγγειακού συστήματος στο σύνολό του. Τα δεδομένα που ελήφθησαν μπορούν να χρησιμοποιηθούν στον σχεδιασμό προκλινικών μελετών για τη διεύρυνση του φάσματος των επιπλοκών που σχετίζονται με τη χρήση 4-mmc, καθώς και για τη δημιουργία ενός αλγορίθμου κλινικών συστάσεων για τη φαρμακολογική διόρθωση αυτών των περίπλοκων καταστάσεων.
- Λαμβάνοντας υπόψη ότι η μεφεδρόνη πιθανότατα μειώνει τη διαπερατότητα της αιμάτωσης του κυτταρικού τοιχώματος και τη λειτουργία μεταφοράς των πρωτεϊνών, επηρεάζει τόσο την παθητική όσο και τη διευκολυνόμενη διάχυση και την ενεργό μεταφορά, επηρεάζει τα γνωστικά πρότυπα με ορισμένο τρόπο (συμπεριλαμβανομένων των καθυστερημένων φαινομένων) και έχει επίσης την ικανότητα να επηρεάζει θετικά τη συνιστώσα της πήξης της αιμόστασης (υπερπηκτικότητα), μπορεί να υποτεθεί ότι η δραστηριότητα της COX-2 είναι κυρίαρχη ως το κύριο ένζυμο που παίζει ρόλο στην επαγωγή της εναλλακτικής φάσης της φλεγμονής. Συνεπώς, η χρήση εκλεκτικών αναστολέων της COX-2 για τη θεραπεία φλεγμονωδών νόσων σε ασθενείς που χρησιμοποιούν 4-mmc είναι η πλέον προτιμητέα και δικαιολογημένη. Ωστόσο, για τον ακριβή καθορισμό της φαρμακολογικής θεραπείας με στόχο την ανακούφιση των φλεγμονωδών διεργασιών που σχετίζονται με τη χρήση 4-mmc, απαιτούνται πρόσθετες προκλινικές μελέτες.
- Τα αποτελέσματα στο τρίτο στάδιο της μελέτης απέδειξαν μείωση της μεταβολικής και απορροφητικής δραστηριότητας των ουδετερόφιλων σε αρουραίους που ανήκαν στην ομάδα 3 (ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση 4-mmc) σε σύγκριση με τους δείκτες των ζώων της ομάδας ελέγχου. Αυτό ορίζει τη μεφεδρόνη ως ουσία που έχει ανοσοκατασταλτική δράση. Το συμπέρασμα αυτό αποτελεί τη βάση για περαιτέρω μελέτες σχετικά με την παθογενετική διορθωτική ανοσοθεραπεία.
Last edited by a moderator: