Οι μεθοδολογίες Crispr, ενώ είναι χρήσιμες και πολύ απλές στη χρήση από τους μυημένους, εξακολουθούν να είναι πολύ περίπλοκες. Έχετε κάποια εμπειρία στη συνθετική βιολογία; Γνωρίζετε τα διάφορα στοιχεία που υπάρχουν σε ένα γονίδιο και τα οποία καθορίζουν την ένταση και τις συνθήκες υπό τις οποίες εκφράζεται; Τι γνωρίζετε για τον γενετικό κώδικα, τη βελτιστοποίηση των κωδικονίων, τον σχεδιασμό εκκινητών, τους φορείς κλωνοποίησης και έκφρασης, τη δομή του συμπλόκου CRISPR-Cas9; Αυτές δεν είναι τυχαίες λέξεις, είναι όλες έννοιες που θα πρέπει να κατακτήσετε πλήρως πριν από την επιτυχή διαμόλυνση ενός κυττάρου θηλαστικού, πόσο μάλλον του δικού σας.
Για να αποκτήσετε ένα γονίδιο που θα θέλατε, θα πρέπει πρώτα να βρείτε την αλληλουχία του σε μια βάση δεδομένων γονιδίων, κάτι που είναι πολύ εύκολο και ελεύθερα διαθέσιμο στο διαδίκτυο, καθώς και έναν κατάλληλο υποκινητή, να επικολλήσετε αυτά τα δύο στοιχεία μαζί, καθώς και εκκινητές PCR (με θέσεις περιορισμού για πέψη από ένζυμα περιορισμού), και να τα στείλετε σε μια εταιρεία σύνθεσης DNA κατά παραγγελία. Υπάρχουν ένα σωρό από αυτές, μερικές είναι πολύ φθηνότερες από άλλες.
Διαφορετικά, θα μπορούσατε να αγοράσετε μόνο το σκέλος του υποκινητή και να πάρετε το γονίδιο που σας ενδιαφέρει με PCR από μια φυσική πηγή ή να αγοράσετε απευθείας το γονίδιο αν είναι κοινό, όπως το σύστημα της λουσιφεράσης (αλλά γιατί να θέλετε να λάμπετε στο σκοτάδι lol)
Στη συνέχεια, μπορείτε να το εισάγετε σε ένα πλασμίδιο CRISPR καθώς και ένα κατάλληλο σκέλος οδηγό για να στοχεύσετε μια συγκεκριμένη θέση στο γονιδίωμα.
Μπορείτε να αναζητήσετε το κανάλι youtube "the thought emporium" το οποίο έκανε ένα τέτοιο πείραμα στον εαυτό του, αλλά ΠΑΡΑΚΑΛΩ να ερευνήσετε το σχέδιό σας για τουλάχιστον μερικά χρόνια πριν προχωρήσετε σε αυτό