Introducción.
El objetivo principal de esta investigación es evaluar la posibilidad de determinar los principales fármacos en fluidos biológicos mediante métodos rápidos disponibles en el mercado. Este artículo responde a las siguientes preguntas.
- ¿Las pruebas de farmacia para 3-20$ revelan realmente el hecho de usar las sustancias declaradas? (Las tiras reactivas combinadas clásicas contienen escalas para la determinación de anfetamina, metanfetamina, cocaína, marihuana, opiáceos).
- ¿Podrían servir estas tiras reactivas para Alfa-PVP y Mefedrona? (No existen pruebas especializadas en farmacias)
La razón de utilizar la prueba más común de farmacia, que es fácil de comprar, es que la investigación debe ser útil y tiene aplicación práctica.
Importante: se pueden utilizar otros kits de pruebas de flujo lateral (LFT) con diferentes etiquetas, una empresa fabricante no importa porque cualquier kit de prueba tiene el mismo mecanismo de trabajo y tienen una eficacia comparable.
Acerca de LFT.
Las pruebas de flujo lateral (LFT), también conocidas como ensayos inmunocromatográficos de flujo lateral o pruebas rápidas, son dispositivos sencillos destinados a detectar la presencia de una sustancia diana en una muestra líquida sin necesidad de equipos especializados y costosos. Estas pruebas se utilizan ampliamente en diagnósticos médicos para pruebas caseras, pruebas en puntos de atención o uso en laboratorio. Por ejemplo, la prueba de embarazo casera es un LFT que detecta una hormona específica. Estas pruebas son sencillas, económicas y suelen mostrar resultados en unos cinco a 30 minutos. Muchas aplicaciones de laboratorio aumentan la sensibilidad de las pruebas de función pulmonar sencillas empleando equipos específicos adicionales.
Las pruebas de función hepática se basan en los mismos principios que los ensayos inmunoenzimáticos (ELISA). En esencia, estas pruebas hacen pasar la muestra líquida por la superficie de una almohadilla con moléculas reactivas que muestran un resultado visual positivo o negativo. Las almohadillas se basan en una serie de lechos capilares, como trozos de papel poroso, polímero microestructurado o polímero sinterizado. Cada una de estas almohadillas tiene la capacidad de transportar fluido (por ejemplo, orina, sangre, saliva) de forma espontánea.
La almohadilla de muestra actúa como una esponja y retiene un exceso de fluido de muestra. Una vez empapada, el fluido fluye hacia la segunda almohadilla de conjugado, en la que el fabricante ha almacenado partículas bioactivas liofilizadas denominadas conjugados (véase más adelante) en una matriz de sal-azúcar. La almohadilla de conjugados contiene todos los reactivos necesarios para una reacción química optimizada entre la molécula diana (por ejemplo, un antígeno) y su socio químico (por ejemplo, un anticuerpo) que se ha inmovilizado en la superficie de la partícula. Estas marcas se dirigen a las partículas a medida que atraviesan la almohadilla y continúan hasta las líneas de prueba y control. La línea de prueba muestra una señal, a menudo de color, como en las pruebas de embarazo. La línea de control contiene ligandos de afinidad que muestran si la muestra ha pasado y las biomoléculas de la almohadilla conjugada están activas. Tras pasar por estas zonas de reacción, el fluido entra en el material poroso final, la mecha, que actúa simplemente como contenedor de residuos.
Las pruebas de función hepática se basan en los mismos principios que los ensayos inmunoenzimáticos (ELISA). En esencia, estas pruebas hacen pasar la muestra líquida por la superficie de una almohadilla con moléculas reactivas que muestran un resultado visual positivo o negativo. Las almohadillas se basan en una serie de lechos capilares, como trozos de papel poroso, polímero microestructurado o polímero sinterizado. Cada una de estas almohadillas tiene la capacidad de transportar fluido (por ejemplo, orina, sangre, saliva) de forma espontánea.
La almohadilla de muestra actúa como una esponja y retiene un exceso de fluido de muestra. Una vez empapada, el fluido fluye hacia la segunda almohadilla de conjugado, en la que el fabricante ha almacenado partículas bioactivas liofilizadas denominadas conjugados (véase más adelante) en una matriz de sal-azúcar. La almohadilla de conjugados contiene todos los reactivos necesarios para una reacción química optimizada entre la molécula diana (por ejemplo, un antígeno) y su socio químico (por ejemplo, un anticuerpo) que se ha inmovilizado en la superficie de la partícula. Estas marcas se dirigen a las partículas a medida que atraviesan la almohadilla y continúan hasta las líneas de prueba y control. La línea de prueba muestra una señal, a menudo de color, como en las pruebas de embarazo. La línea de control contiene ligandos de afinidad que muestran si la muestra ha pasado y las biomoléculas de la almohadilla conjugada están activas. Tras pasar por estas zonas de reacción, el fluido entra en el material poroso final, la mecha, que actúa simplemente como contenedor de residuos.
Existen dos tipos de LFT: el método directo y el competitivo.
El LFT directo (sándwich ) utiliza un conjugado anticuerpo-etiqueta infligido sobre una membrana conjugada. Los anticuerpos específicos del analito se inmovilizan en la línea de prueba, y los anticuerpos antiespecies específicos de los anticuerpos primarios se inmovilizan en la línea de control. Cuando la muestra, que contiene una sustancia analizada, se aplica a la franja de prueba y esta muestra golpea la membrana con el conjugado, el analito se une al conjugado AT-tag. A continuación, el inmunocomplejo entra en la zona de prueba, donde se une a anticuerpos específicos, formando un "sándwich" de Ab-Ag-Ab-tag. El exceso de conjugado no unido se une a los anticuerpos anti-especie en la línea de control. Por lo tanto, 2 líneas en la tira reactiva es un resultado positivo. Sino hay sustancia analizada en la muestra, el conjugado se une a los anticuerpos antiespecie sólo en la línea de control, formando una línea en la tira reactiva. El método LFT directo se utiliza para detectar compuestos de alto peso molecular - virus, incluido el VIH; diversas hormonas (por ejemplo, en pruebas de embarazo), agentes patógenos de enfermedades infecciosas.
El método LFTcompetitivo utilizado para la determinación de compuestos de bajo peso molecular se basa en la competencia entre el analito y el conjugado inmovilizado analito:proteína portadora por un número limitado de sitios de unión para anticuerpos específicos contenidos en el conjugado Ab-tag. Cuando se aplica una muestra que contiene el analito, éste se une al conjugado AT-tag en la membrana del conjugado. A continuación, el inmunocomplejo pasa a través de la zona de prueba, donde se inmoviliza el conjugado analito:proteína portadora. El inmunocomplejo no puede unirse a este conjugado debido a impedimentos estéricos: los compuestos de bajo peso molecular suelen tener un determinante antigénico y, en consecuencia, los anticuerpos tienen un sitio de unión al antígeno, que ya está ocupado por el analito. A continuación, el complejo inmunitario se une a los anticuerpos antiespecie de la línea de control. Como resultado, la ausencia de una banda coloreada en la zona de prueba y la presencia de un color en la zona de control indica que la concentración del analito en la muestra de prueba supera su valor umbral para esta prueba.
Si no hay analito en la muestra, el conjugado Ab-tag se une al conjugado Ag:proteína portadora inmovilizado en la zona de la línea de prueba. El conjugado Ab-tag no unido entra en la zona de la línea de control y se une allí con los anticuerpos anti-especie. Así, la presencia de dos líneas coloreadas (test y control) es un resultado de análisis negativo.
El formato LFT competitivo se utiliza para detectar compuestos de bajo peso molecular, incluidos metabolitos de compuestos narcóticos en orina, fluido oral y extractos de tejidos.
El método LFTcompetitivo utilizado para la determinación de compuestos de bajo peso molecular se basa en la competencia entre el analito y el conjugado inmovilizado analito:proteína portadora por un número limitado de sitios de unión para anticuerpos específicos contenidos en el conjugado Ab-tag. Cuando se aplica una muestra que contiene el analito, éste se une al conjugado AT-tag en la membrana del conjugado. A continuación, el inmunocomplejo pasa a través de la zona de prueba, donde se inmoviliza el conjugado analito:proteína portadora. El inmunocomplejo no puede unirse a este conjugado debido a impedimentos estéricos: los compuestos de bajo peso molecular suelen tener un determinante antigénico y, en consecuencia, los anticuerpos tienen un sitio de unión al antígeno, que ya está ocupado por el analito. A continuación, el complejo inmunitario se une a los anticuerpos antiespecie de la línea de control. Como resultado, la ausencia de una banda coloreada en la zona de prueba y la presencia de un color en la zona de control indica que la concentración del analito en la muestra de prueba supera su valor umbral para esta prueba.
Si no hay analito en la muestra, el conjugado Ab-tag se une al conjugado Ag:proteína portadora inmovilizado en la zona de la línea de prueba. El conjugado Ab-tag no unido entra en la zona de la línea de control y se une allí con los anticuerpos anti-especie. Así, la presencia de dos líneas coloreadas (test y control) es un resultado de análisis negativo.
El formato LFT competitivo se utiliza para detectar compuestos de bajo peso molecular, incluidos metabolitos de compuestos narcóticos en orina, fluido oral y extractos de tejidos.
Explicación más sencilla.
Si no lo entiendes, te lo explico de una forma más sencilla. Hay anticuerpos etiquetados al principio de cada tira reactiva. Debido a la estructura de la tira reactiva, la orina se esparce a lo largo de ella, llevando los complejos resultantes a la zona de prueba, donde se fijan los ligamentos fármaco-proteína. Dado que el anticuerpo del complejo inmunitario llegado ya es absorbido por la droga de la orina, no puede fijarse en la zona de prueba y se desplaza a la zona de control, donde se une al anticuerpo antiespecie, coloreando una tira en la escala (resultado positivo).
Si no hay droga en la bio muestra, los anticuerpos se mueven en la orina a lo largo de la tira reactiva, quedando libres. Cuando el complejo anticuerpo-proteína se encuentra en la zona de prueba, algunos anticuerpos marcados se unen a él (aparece la primera tira), el resto se mueve con el flujo de orina en la zona de control, donde también se une al anticuerpo anti-especie, resaltando la segunda tira (2 tiras - resultado negativo). Si la línea aparece en la zona de prueba pero no aparece en la zona de control (debería aparecer siempre) - la prueba es defectuosa.
Si no hay droga en la bio muestra, los anticuerpos se mueven en la orina a lo largo de la tira reactiva, quedando libres. Cuando el complejo anticuerpo-proteína se encuentra en la zona de prueba, algunos anticuerpos marcados se unen a él (aparece la primera tira), el resto se mueve con el flujo de orina en la zona de control, donde también se une al anticuerpo anti-especie, resaltando la segunda tira (2 tiras - resultado negativo). Si la línea aparece en la zona de prueba pero no aparece en la zona de control (debería aparecer siempre) - la prueba es defectuosa.
Las sustancias fueron utilizadas por voluntarios que no tomaron nada psicoactivo durante un período de tiempo suficiente, se tomó orina para su análisis. He aquí los resultados del experimento.
Experimentos.
ANFETAMINAPrincipales metabolitos: anfetamina, 4-hidroxianfetamina, 4-hidroxinorefedrina, 4-hidroxifenilacetona, ácido benzoico, ácido hipúrico, norefedrina, fenilacetona.
COCAÍNA.
Principales metabolitos: benzoilecgonina, éster metílico de ecgonina, ecgonina, norcocaína, p-hidroxicaína, m-hidroxicaína, p-hidroxibenzoilecgonina, m-hidroxibenzoilecgonina.
Si observa la prueba de la derecha, podrá ver por qué las tiras reactivas deben manejarse con un punto de vista crítico. La persona analizada no ha consumido recientemente ningún PAS, excepto cocaína.
HEROÍNA.
Principales metabolitos: morfina, normorfina, hidromorfona.
MDMA / ÉXTASIS.
Principales metabolitos: 3,4-metilendioximetanfetamina (MDMA), 3,4-metilendioxianfetamina (MDA), 4-hidroxi-3-metoximetanfetamina (HMMA), 4-hidroxi-3-metoxianfetamina (HMA).
Existen tiras reactivas de MDMA / Éxtasis, pero son más difíciles de encontrar. La anfetamina y la metanfetamina se encontraron en la orina. Esto se explica por su pertenencia común a la misma clase y, en consecuencia, por la similitud estructural de las sustancias y sus metabolitos. Las escalas de THC (cannabinoides) y OPI (opiáceos) en la segunda prueba no participan en el experimento (no se activan). Según la foto de la izquierda, estas sustancias no se detectan en relación con el consumo de MDMA.
MDMA
MEFEDRONA.
Principales metabolitos: mefedrona, nor-mefedrona, 4'-carboxi-mefedrona, 1'-dihidro-mefedrona, N-succinil-nor-mefedrona.
Un comentario interesante de los editores del sitio https://www.zoomtesting.co.uk,"Algunos vendedores señalan que una prueba de metanfetamina puede utilizarse para detectar mefedrona. Sin embargo, esto es incorrecto. La estructura química de la metanfetamina y de la mefedrona es diferente, por lo que la prueba de la metanfetamina no será válida para la mefedrona". Bien, vamos a comprobarlo.
Además de las sustancias estándar, se utilizó otra tira reactiva para detectar barbitúricos. Está claro que algo falla en esta tira reactiva. La prueba fue repetida por otro voluntario que nunca había consumido barbitúricos ni preparados que los contuvieran, con un resultado similar.
ALFA-PVP (alfa-pirrolidinovalerofenona).
La segunda línea de la ventana PCP está casi completamente ausente.
MARIJUANA.
Principales metabolitos: tetrahidrocannabinol (THC), 11-hidroxi-THC, 11-nor-9-carboxi-THC. Cannabis bien determinado y siempre sólo en su ventana "THC" (tetrahidrocannabinol), es suficiente para demostrar en la prueba más simple.
Conclusión.
Las pruebas llevan detectando drogas en fluidos corporales mucho más tiempo del que se siente su efecto psicoactivo. Son bastante baratos, tienen buena sensibilidad y son sólo marginalmente inferiores a los métodos utilizados en el laboratorio. Recuerde su seguridad - si hay necesidad de comprobar usted mismo su "limpieza", las pruebas exprés serán indispensables.
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