GC-MS-meetodid ravimite jaoks

[G.Patton]

Sissejuhatus:

Mul on laialdased kogemused ravimite kvaliteedi määramisel kromatograafia-massispektromeetria abil. Otsustasin kirjutada selle juhendi keemikutele, kes soovivad alustada ravimite testimist GC-MS-seadmete abil.
Hoolimata kromato-mass-spektromeetria laialdastest võimalustest on võimaluste piirangud. Massidetektor koos kromatograafiga ei saa määrata anorgaanilisi aineid, orgaanilisi aineid, mille molekulmass on üle 450 Da, ega orgaanilisi aineid, mille keemistemperatuur on kõrge (>350 ◦C).

Seadme omadused:

Kõigepealt tuleb kindlaks määrata, kas gaasikromatograafi abil on võimalik teha analüüse. Nende eesmärkide saavutamiseks võib kasutada kõige populaarsemaid sobivaid GC-MS-süsteeme, nagu gaasikromatograaf Agilent 7890, mis on ühendatud Agilent 5975C kvadrupoolse massidetektoriga või Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole GC-MS. Peamine omadus, mida peate teadma - see on kapillaarkolonni polaarsus. Enamiku ravimite jaoks on vaja mittepolaarset või nõrgalt polaarset kapillaarkolonni. Näiteks HP-1/DB-1 või HP-5/DB-5 on parim valik paljude rakenduste jaoks. Samuti peate teadma massi vahemikku, mida teie massidetektor suudab SCAN-režiimis tuvastada. Tavaliselt on vaja 30-450 m/z vahemikku, sellest piisab kõikide ravimitüüpide määramiseks. Enamik neist saab kindlaks teha vahemikus 30-350 m/z.

Proovi ettevalmistamise protseduur:

Kõik ravimid jäävad suurema stabiilsuse tõttu soola kujul, mis võimaldab hoida neid pikka aega ilma struktuurimuutusteta. Näiteks amfetamiinil on lämmastiku aatom, see on alus, mis on seotud happeioon(id) kujul 2-(SO4), -Cl, 3-(PO4). Te peate saama analüüsi aine vaba aluse. Samuti, kui te ei tea, milline aine teil on analüüsimiseks, peate te tegema katse kvalitatiivseks määramiseks, kasutades reaktiive, mida ma varem mainisin(Narkootikumide testimise reaktiivid).

Universaalne valmistamine on üsna lihtne. Asetage proovi alikvoot kolbi ja täitke see puhta lahustiga (CCl4/ CH2Cl2). Valmistage ligikaudu 10-1000 mkg/ml lahust. Enamikku narkootilisi aineid ei saa lahustada süsiniktetrakloriidis/diklorometaanis. Pärast seda tuleb sellesse kolbi lisada 1-2 mahu 30-40% NaOH/KOH vesilahust koos narkootikumide lahusega ja segada seda põhjalikult.

Peaaegu sama preparaati kasutatakse märkide(LSD, NBOMe, NBOH jne ) puhul. Võtta mark deklareeritud ainekogusega ja lõigata see kolbi, lisada puhas lahusti (soovitatav on CH2Cl2). Valmistage ligikaudu 10-1000 mkg/ml lahust. Pärast seda tuleb sellesse kolbi lisada 1-2 mahu 30-40% NaOH/KOH vesilahust koos ravimilahusega ja segada hoolikalt.

Saate analüüsitava ravimi vaba aluse, mis migreerub orgaanilise lahusti kihti. Tuleb süstida 1 mkl ravimilahust ja alustada analüüsi.

GC-MS meetodid.
Suure hulga ravimite puhul:

GC-MS-süsteem, mis töötab 70 eV juures elektronionisatsiooni režiimis. Seade on varustatud 5% fenüülmetüülsilikooni kapillaarkolonniga (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m paksune kile). Kandjagaasina kasutatakse heeliumi konstantse vooluga 1 ml/min. Kromatograafilised tingimused olid järgmised: ahju temperatuur hoitakse 2 minutit temperatuuril 130 ◦C, seejärel tõstetakse temperatuurini 270 ◦C kiirusel 15 ◦C/min. Süstepordi temperatuur 270 ◦C jaotusrežiimil jaotusraito 25:1. Massidetektor töötab skaneerimisrežiimis (skaneerimisvahemik m/z 30-390).

LSD, NBOMe, NBOH märkide puhul:

GC-MS-süsteem töötab 70 eV juures elektronionisatsioonirežiimil. Seade on varustatud 5% fenüülmetüülsilikoonist kapillaarkolonniga (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m paksune kile). Kandjagaasina kasutatakse heeliumi konstantse vooluga 1 ml/min. Kromatograafilised tingimused olid järgmised: ahju temperatuur hoitakse 2 minutit temperatuuril 40 ◦C, seejärel tõstetakse temperatuurini 210 ◦C kiirusega 15 ◦C/min, seejärel tõstetakse temperatuurini 280 ◦C kiirusega 5 ◦C/min ja hoitakse 20 minutit. Süstelahendus, mis on seatud 280 ◦C-le, on jaotamata režiimis. Massidetektor töötas skaneerimisrežiimis (skaneerimisvahemik m/z 30-450).

Kokkuvõte:
Nagu näha, on proovide ettevalmistamine üsna lihtne. See ei vaja kalleid reaktiive ega keerulisi manipulatsioone. Siiski on see protseduur väga oluline asjakohaste analüüsitulemuste saamiseks.

 

[Cocojamba]

Kuidas on lood teiste GC-MS-süsteemidega? Või töötavad need meetodid ainult Agilenti või Thermo Scientificiga?

 

[G.Patton]

Tegelikult ei saa kasutada mis tahes süsteemi samade spetsifikatsioonidega.