Indoli-3-laktaattilisäyksen vaikutus multippeliskleroosin eläinmalleissa
Aloitan tyhjästä perus puskamekaniikan taidoilla.
Ei ole paljon sellaista, mitä en voisi tehdä, jos minulla olisi riittävästi aikaa, mutta se on degeneratiivisten sairauksien ongelma.
Kuten tiedätte, on vaikea saada tietoa lääketieteen ammattilaisilta tai kemikaalien toimittajilta.
Haluan elää.
En väitä, että tästä on hyötyä, mutta ehkä voitte auttaa minua ymmärtämään enemmän.
Parasta, mitä minulla on tähän mennessä, on kemikaalien toimittajien sivustoilla olevista tiedoista:
Miten valmistetaan kantaliuos?
Valitse sopiva liuotin konsentroidun kantaliuoksen valmistamiseksi kokeen vaatimusten mukaisesti. Liukoisuustiedot löytyvät verkkosivujemme tuotesivulta. In vitro -kokeissa liuottimena käytetään usein DMSO:ta.
Tämän jälkeen kantaliuos laimennetaan työliuoksen valmistamiseksi (esim. 1:1000-laimennus soluviljelyaineeseen).
Seuraavassa on joitakin suosituksia tuotteen liuottamiseen:
(1) Laske kantaliuoksen konsentraatio uudelleen seuraavan kaavan mukaisesti: Todellinen konsentraatio (mg/ml) = Molekyylipaino (g/mol) x konsentraatio (mM) x 10-3.
(2) Tarkista, onko liuotin kontaminoitunut,esim. DMSO imee kosteutta.
(3) Joitakin yhdisteitä on vaikea liuottaa niiden rakenteen ja kemiallisten ominaisuuksien vuoksi, ja ne saattavat vaatia lisäsekoittamista, kuten vortexiä tai ultraääntä. Tarvittaessa myös yhdisteen kuumentaminen voi auttaa liukenemisprosessissa. Muista kuitenkin, että yhdistettä ei saa lämmittää yli 45 ℃, jotta tuote ei muutu.
Miten tuotetta säilytetään?
Säilytä -20 ℃ tai -80 ℃:ssa Aliquotoi kantaliuos rutiinikäyttömääriin ja säilytä -20 ℃ tai -80 ℃:ssa. Vältä toistuvaa jäädyttämistä ja sulattamista.
Miten valmistetaan käyttöliuos?
(1) Laske tarvittava laimennus käyttämällä laimennuslaskuria.
(2) Lisää kantaliuosta hitaasti liuottimeen, kunnes saavutetaan haluttu pitoisuus.
Sekoita vorteksoimalla tai toistuvasti pipetoimalla.
(3) Jos työliuoksessa on saostumaa, anna työliuoksen seistä 10 minuuttia,vortexaa tai pipetoi sekoittamalla ja tarkista sitten uudelleen.
(4) Yhdisteemme ovat enimmäkseen liposolubisia. Saostumista voi esiintyä, kun laimennetaan käyttämällä vesiliuottimia, kuten soluviljelyalustaa tai PBS:ää Täydellinen liukeneminen voidaan saavuttaa ultraäänellä.
Mihin minun tulisi kiinnittää huomiota solupohjaisissa määrityksissä?
DMSO:ta käytetään kantaliuoksen valmistukseen useimmissa solupohjaisissa määrityksissä. Varastoliuos laimennetaan kasvatusalustaan työliuoksen valmistamiseksi. Varmista, että DMSO:n konsentraatio on <=0,1 %, jotta solut eivät myrkytyisi Yleensä negatiivinen kontrolli kokeessa on kasvatusmedium, jossa on DMSO:ta samassa konsentraatiossa.
Mihin minun tulisi kiinnittää huomiota eläinkokeissa?
(1) Yhdisteemme ovat enimmäkseen rasvaliukoisia. Jos DMSO:ta käytetään kantaliuoksen valmistamiseen ja laimennetaan sitten käyttöliuoksen valmistamiseksi eläinkokeisiin, ei välttämättä ole mahdollista saada tarvittavia annoksia. Sen sijaan tarvitaan hydrotrooppisia aineita, kuten natriumkarboksimetyyliselluloosaa (CMC-Na), Tween 80:tä tai glyserolia.
Esimerkiksi hiirellä käytetyn annoksen (20 m/kg) muuntamiseksi 1,5 kg painavalle kanille käytetyksi annokseksi:
Ryhmä A Eläin: hiiri; Ryhmä B Eläin: Kani;
Muuntokerroin:
0,37 Kaniinissa käytetty annos olisi 1,5kg*(0,37*20mg/kg) =11,1mg.
