Johdanto.
Miten ohutkerroskromatografia toimii?
Valmistaminen.
Kromatogrammin tuottaminen.
Ota yksi muovi- tai lasipurkki, kaada 10-15 ml vettä, 4-5 tippaa jodialkoholi-liuosta. Sekoita 7-10 minuuttia. Valuta vesi. Jodi saostuu vedessä purkin sivuille. Laita tämä purkki astiaan.
Retentiokerroin
Kun erotus on saatu päätökseen, yksittäiset yhdisteet näkyvät pystysuoraan toisistaan erottuvina pisteinä. Kullakin pisteellä on retentiokerroin (Rf), joka on yhtä suuri kuin siirtynyt matka liuottimen kuljettaman kokonaismatkan suhteen. Rf-kaava on Rf = näytteen kulkema matka / liuottimen kulkema matka.
Rf-arvoa voidaan käyttää yhdisteiden tunnistamiseen, koska se on jokaiselle yhdisteelle yksilöllinen. Kun verrataan kahta eri yhdistettä samoissa olosuhteissa, yhdiste, jolla on suurempi Rf-arvo , on vähemmän poolinen, koska se ei tartu stationäärifaasiin yhtä kauan kuin poolinen yhdiste, jolla olisi pienempi Rf-arvo. Rf-arvoihin ja toistettavuuteen voivat vaikuttaa monet eri tekijät, kuten kerroksen paksuus, TLC-levyn kosteus, astian kyllästys, lämpötila, liikkuvan faasin syvyys, TLC-levyn luonne, näytteen koko ja liuotinparametrit. Nämä vaikutukset aiheuttavat yleensä Rf-arvojen nousua. Kerrospaksuuden tapauksessa Rf-arvo kuitenkin pienenee, koska liikkuva faasi liikkuu hitaammin levyllä ylöspäin.
Tulosten käsittely
Metamfetamiini - 0,55
Mefedroni - 0,65
Johtopäätökset.
Kromatografiaa käytetään aineiden seosten erottamiseen komponentteihinsa. Kaikki kromatografian muodot toimivat samalla periaatteella. Tässä artikkelissa selitän tätä menetelmää määrittelemällä amfetamiinin metamfetamiinin ja mefedronin Rf:n.
Kromatografialevyissä on kiinteä faasi (kiinteä aine tai kiinteän aineen päällä oleva neste) ja liikkuva faasi (neste tai kaasu). Liikkuva faasi virtaa pysyvän faasin läpi ja kuljettaa seoksen komponentit mukanaan. Eri komponentit kulkevat eri nopeudella. Tarkastelemme tämän syitä alempana sivulla. Ohutkerroskromatografia tehdään juuri niin kuin se sanookin - käyttäen ohutta, yhtenäistä silikageeli- tai alumiinioksidikerrosta, joka on päällystetty lasin, metallin tai jäykän muovin päälle. Piigeeli (tai alumiinioksidi) on stationäärifaasi. Ohutkerroskromatografian stationäärifaasi sisältää usein myös ainetta, joka fluoresoi UV-valossa tai jodikammiossa - syistä, jotka näet myöhemmin. Liikkuva faasi on sopiva nestemäinen liuotin tai liuottimien seos.
Kromatografialevyissä on kiinteä faasi (kiinteä aine tai kiinteän aineen päällä oleva neste) ja liikkuva faasi (neste tai kaasu). Liikkuva faasi virtaa pysyvän faasin läpi ja kuljettaa seoksen komponentit mukanaan. Eri komponentit kulkevat eri nopeudella. Tarkastelemme tämän syitä alempana sivulla. Ohutkerroskromatografia tehdään juuri niin kuin se sanookin - käyttäen ohutta, yhtenäistä silikageeli- tai alumiinioksidikerrosta, joka on päällystetty lasin, metallin tai jäykän muovin päälle. Piigeeli (tai alumiinioksidi) on stationäärifaasi. Ohutkerroskromatografian stationäärifaasi sisältää usein myös ainetta, joka fluoresoi UV-valossa tai jodikammiossa - syistä, jotka näet myöhemmin. Liikkuva faasi on sopiva nestemäinen liuotin tai liuottimien seos.
Silikageeli on eräs piidioksidin (piidioksidin) muoto. Piiatomit ovat liittyneet toisiinsa happiatomien välityksellä jättimäisessä kovalenttisessa rakenteessa. Piigeelin pinnalla piiatomit ovat kuitenkin kiinnittyneet -OH-ryhmiin. Piigeelin pinnalla on siis Si-O-H-sidoksia Si-O-Si-sidosten sijaan. Kaaviossa näkyy pieni osa piidioksidin pinnasta. Piigeelin pinta on hyvin polaarinen, ja -OH-ryhmien vuoksi se voi muodostaa vetysidoksia ympärillään olevien sopivien yhdisteiden kanssa sekä Van-der-Waalsin dispersiovoimia ja dipoli-dipoli-vetovoimia.
Tarvitset:
1. Ruisku 5 ml:lle х 4
2. Muovinen virtsatestipurkki х 4
3. Isot muovisäiliöt ruokaa varten (tai yksi iso juomalasi ja muovisäiliö) х 2
4. TLC-levy, jossa on silikageelikerros 5x10 cm (voit leikata ison levyn saksilla).
5. Liuottimet etyyliasetaatti, metanoli, heksaani (voidaan korvata hiilitetrakloridilla), ammoniakin vähintään 10 %:n vesiliuos, jodialkoholi liuos.
6. Pehmeä lyijykynä, viivoitin ja pihdit
Älä unohda käsineitä ja hengityssuojainta, järjestä koe tuuletetussa huoneessa.
1. Ruisku 5 ml:lle х 4
2. Muovinen virtsatestipurkki х 4
3. Isot muovisäiliöt ruokaa varten (tai yksi iso juomalasi ja muovisäiliö) х 2
4. TLC-levy, jossa on silikageelikerros 5x10 cm (voit leikata ison levyn saksilla).
5. Liuottimet etyyliasetaatti, metanoli, heksaani (voidaan korvata hiilitetrakloridilla), ammoniakin vähintään 10 %:n vesiliuos, jodialkoholi liuos.
6. Pehmeä lyijykynä, viivoitin ja pihdit
Älä unohda käsineitä ja hengityssuojainta, järjestä koe tuuletetussa huoneessa.
Kromatogrammin tuottaminen.
1. Sinun on valmistettava juokseva liuos etyyliasetaatti:metanoli:ammoniakkiliuos 85:10:5. Ota 10 ml:aa varten 8,5 ml etyyliasetaattia, 1 ml metanolia ja 0,5 ml ammoniakkiliuosta ja sekoita ne.
2. Puhdista levy silikageelillä tällä liuoksella. Laita levy liuokseen, sen on oltava 3-4 mm syvyydessä suuressa dekantterilasissa (kuten kuvassa 1). Voit käyttää pinsettejä mukavaan käsittelyyn. Tärkeää: älä kostuta levyä vedellä, koska se pilaantuu. Levyä on pidettävä liuoksessa, kunnes liuotin on tullut levyn yläreunaan asti.
3. Aloitetaan yksinkertaisesta tapauksesta. Aineita on neljä: amfetamiini(A), metamfetamiini(L), kofeiini(K) ja mefedroni(M).
Tätä koetta varten sinun on saatava vapaa pohja huumeista. Laita 10-15 mg näytettä (muutama möhkäle) lasiseen (muoviseen) purkkiin, puhtaaseen kahteen pisaraan vesiliuosta ammoniakkia. Kaada sitten 3-4 tippaa heksaania tai hiilitetrakloridia ja ravista sitä minuutin ajan. Lääkeaineesi vapaa emäs laimenee orgaaniseen kerrokseen.4. Nyt sinun on asetettava se kromatografialevylle, joka valmistettiin aiemmin. Ota neula ruiskusta ja katkaise se pihdeillä, kuten esimerkissä. Sinun on saatava tasainen reuna.
Ota puhdas ja kuivunut levy ja vedä lyijykynällä viiva ~5-6 mm ylöspäin alareunasta. Mahdolliset merkinnät levylle, jotka osoittavat pisaran alkuperäisen sijainnin, on myös tehtävä lyijykynällä. Jos tämä tehtiin musteella, myös musteesta peräisin olevat väriaineet siirtyvät kromatogrammin kehittyessä. Merkitään neljä pistettä, jotka ovat yhtä kaukana toisistaan. Upotetaan leikatun neulan pää ensimmäisen huumausaineliuoksen orgaaniseen kerrokseen. Kosketa levyä neulan kärjellä ja tee pieni läpimitaltaan 3-4 mm:n suuruinen piste, odota, että se kuivuu, toista menettely 10 kertaa. Toista vaiheet 2 ja 3 muiden aineiden osalta.
Yleinen virhe: älä tee isoa rasvatäplää, koska aineesi voi peittää toisen aineen kokeen aikana.
5. Kun vapaiden emästen läiskät ovat kuivuneet, levy asetetaan matalaan liuotinkerrokseen katetussa dekantterilasissa. On tärkeää, että liuottimen taso on sen viivan alapuolella, jossa pilkku on. Odotetaan, kunnes liuottimen etulinja yltää 4-5 mm ennen levyn yläreunaa, ja vedetään se pois. Tämän jälkeen piirretään lyijykynällä viiva liuottimen etulinjaan. Kuivaa se ilmalla.
6. Kromatogrammi asetetaan suljettuun astiaan (kuten toiseen dekantterilasilla peitettyyn dekantterilasiin tai isoon muovisäiliöön) yhdessä muutaman jodikiteen kanssa. Säiliössä oleva jodihöyry reagoi kromatogrammin pisteiden kanssa. Kiinnostavat aineet voivat näkyä värillisinä täplinä. Jäljitä ne lyijykynällä ja piirrä pisteitä kunkin pisteen keskelle.
Voit myös käyttää UV-lamppua, jonka aallonpituus on 254 ja 365 nm.
Miten jodikammio esivalmistellaan.Yleinen virhe: älä tee isoa rasvatäplää, koska aineesi voi peittää toisen aineen kokeen aikana.
5. Kun vapaiden emästen läiskät ovat kuivuneet, levy asetetaan matalaan liuotinkerrokseen katetussa dekantterilasissa. On tärkeää, että liuottimen taso on sen viivan alapuolella, jossa pilkku on. Odotetaan, kunnes liuottimen etulinja yltää 4-5 mm ennen levyn yläreunaa, ja vedetään se pois. Tämän jälkeen piirretään lyijykynällä viiva liuottimen etulinjaan. Kuivaa se ilmalla.
Ota yksi muovi- tai lasipurkki, kaada 10-15 ml vettä, 4-5 tippaa jodialkoholi-liuosta. Sekoita 7-10 minuuttia. Valuta vesi. Jodi saostuu vedessä purkin sivuille. Laita tämä purkki astiaan.
Retentiokerroin
Kun erotus on saatu päätökseen, yksittäiset yhdisteet näkyvät pystysuoraan toisistaan erottuvina pisteinä. Kullakin pisteellä on retentiokerroin (Rf), joka on yhtä suuri kuin siirtynyt matka liuottimen kuljettaman kokonaismatkan suhteen. Rf-kaava on Rf = näytteen kulkema matka / liuottimen kulkema matka.
Kokeessa sain kolme pistettä odotetun neljän sijasta. Kokeen toistaminen osoittaa, että kofeiini ei eluoidu etyylisetaatti:metanoli:ammoniakkiliuoksella 85:10:5. Kokeellisesti hyväksyttiin, että tämä liuos soveltuu amfetamiinin, metamfetamiinin ja mefedronin kaltaisten huumeiden eluointiin.
Tutkittujen huumausaineiden Rf.
Amfetamiini - 0,53Metamfetamiini - 0,55
Mefedroni - 0,65
Selitys.
Minulla on kaksi levyä, joissa on tulokset. Kaksi mitattua etäisyyttä alkupisteen ja ympyröidyn pisteen keskikohdan välillä. Amfetamiinipisteen etäisyys lähtöviivasta oli ensimmäisellä levyllä 42 mm ja toisella levyllä 49 mm, liuottimen etulinjan etäisyys vastaavasti 85 mm ja 86 mm. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Sitten laskin aritmeettisen keskiarvon 0,53. Samat laskelmat tehtiin muille aineille.
Minulla on kaksi levyä, joissa on tulokset. Kaksi mitattua etäisyyttä alkupisteen ja ympyröidyn pisteen keskikohdan välillä. Amfetamiinipisteen etäisyys lähtöviivasta oli ensimmäisellä levyllä 42 mm ja toisella levyllä 49 mm, liuottimen etulinjan etäisyys vastaavasti 85 mm ja 86 mm. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Sitten laskin aritmeettisen keskiarvon 0,53. Samat laskelmat tehtiin muille aineille.
Johtopäätökset.
Kokeesta käy ilmi, että voit mitata lääkkeesi Rf-arvon ja verrata sitä tunnettuun aineeseen samassa levyssä. Tee pilkku lääkkeestäsi, jossa ei ole pohjaa, ja 1-4 pilkkua muista lääkkeistä Rf:n tarkistamiseksi. Jos pilkut ovat samalla etäisyydellä lähtöviivasta, ne ovat todennäköisesti samaa ainetta. Myös jos saat useita täpliä lääkkeestäsi, sinulla on todennäköisesti aineiden seos. Joillakin lääkeaineilla on useita täpliä, koska ne ovat lääkeaineen ja synteesin sivutuotteiden sekoitusta. Voit kuitenkin verrata niitä muihin lääkkeisiin käyttämällä ohutkerroskromatografiaa.
Attachments
Last edited by a moderator:
