Les méthodologies Crispr, bien qu'utiles et très simples d'utilisation pour les initiés, restent très complexes. Avez-vous de l'expérience en biologie synthétique ? Connaissez-vous les différents éléments présents dans un gène qui déterminent l'intensité et les conditions de son expression ? Que savez-vous du code génétique, de l'optimisation des codons, de la conception des amorces, des vecteurs de clonage et d'expression, de la structure du complexe CRISPR-Cas9 ? Il ne s'agit pas de mots au hasard, mais de concepts que vous devrez maîtriser avant de réussir à transfecter une cellule de mammifère, et a fortiori la vôtre.
Pour obtenir un gène, vous devrez d'abord trouver sa séquence dans une base de données de gènes, ce qui est très facile et librement disponible en ligne, ainsi qu'un promoteur approprié, coller ces deux éléments ensemble ainsi que des amorces PCR (avec des sites de restriction pour la digestion par des enzymes de restriction), et envoyer le tout à une société de synthèse d'ADN sur mesure. Il en existe un grand nombre, dont certaines sont beaucoup moins chères que d'autres.
Sinon, vous pouvez seulement acheter le brin promoteur et obtenir votre gène d'intérêt par PCR à partir d'une source naturelle ou acheter le gène directement s'il s'agit d'un gène commun tel que le système luciférase (mais pourquoi voudriez-vous briller dans le noir lol).
Vous pouvez ensuite l'insérer dans un plasmide CRISPR ainsi qu'un brin guide approprié pour cibler un endroit spécifique du génome.
Vous pouvez regarder la chaîne youtube "the thought emporium" qui a fait une telle expérience sur lui-même, mais VEUILLEZ faire des recherches sur votre projet pendant AU MOINS QUELQUES ANNÉES avant de le réaliser.