GC-MS módszerek gyógyszerekhez

[G.Patton]

Bevezetés:

Nagy tapasztalattal rendelkezem a gyógyszerek minőségének kromatográfia-tömegspektrometriás meghatározásában. Úgy döntöttem, hogy megírom ezt az útmutatót azon vegyészek számára, akik el akarják kezdeni a gyógyszerek vizsgálatát GC-MS berendezéssel.
A kromato-tömegspektrometria széleskörű lehetőségei ellenére a lehetőségeknek vannak korlátai. A tömegdetektor a kromatográffal tandemben nem tudja meghatározni a szervetlen anyagokat, a 450 Da-nál nagyobb molekulatömegű szerves anyagokat vagy a magas forráspontú (>350 ◦C) szerves anyagokat.

A berendezés jellemzői:

Először is meg kell határoznia, hogy a gázkromatográffal milyen lehetőségekkel rendelkezik az elemzés elvégzésére. A legnépszerűbb megfelelő GC-MS rendszerek, mint az Agilent 7890 gázkromatográf, Agilent 5975C kvadrupolos tömegdetektorral összekapcsolva, vagy a Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole GC-MS használható e célokra. A fő jellemző, amit tudnia kell - ez a kapilláris oszlop polaritása. A gyógyszerek többségéhez nem polaritású vagy gyengén poláros kapilláris oszlopra van szükség. Például a HP-1/DB-1 vagy a HP-5/DB-5 a legjobb választás az alkalmazások széles körére. Szintén ismernie kell azt a tömegtartományt, amelyet a tömegdetektor SCAN üzemmódban érzékelni képes. Általában 30-450 m/z tartományra van szükség, ez elegendő minden típusú gyógyszer meghatározásához. A legtöbbjüket 30-350 m/z között lehet megállapítani.

Minta előkészítési eljárás:

A nagyobb stabilitás miatt minden gyógyszer só formában marad, ami lehetővé teszi, hogy hosszú ideig tároljuk őket szerkezeti változások nélkül. Az amfetamin például nitrogénatomot tartalmaz, ez a bázis, amely savion(ok)hoz kötődik, mint 2-(SO4), -Cl, 3-(PO4). Meg kell kapnia az analitikai anyag szabad bázisát. Továbbá, ha nem tudja, hogy milyen anyaggal van dolga az elemzéshez, akkor a korábban említett reagensek(Kábítószer-vizsgálati reagensek) segítségével kell kísérletet végeznie a minőségi meghatározásra.

Az univerzális előkészítés meglehetősen egyszerű lesz. Helyezze a minta aliquotáját egy lombikba, és töltse fel tiszta oldószerrel (CCl4/ CH2Cl2). Készítsen körülbelül 10-1000 mkg/ml oldatot. A legtöbb narkotikus anyag nem oldható szén-tetrakloridban/diklórmetánban. Ezt követően 1-2 térfogat 30-40%-os NaOH/KOH vizes oldatot kell hozzáadni ehhez a lombikhoz a kábítószeroldattal együtt, és alaposan el kell keverni.

Majdnem ugyanezt az előkészítést használják a jeleknél(LSD, NBOMe, NBOH stb.) . Vegyünk egy jelet a bejelentett mennyiségű anyaggal, és vágjuk bele a lombikba, adjunk hozzá tiszta oldószert (CH2Cl2 ajánlott). Készítsen körülbelül 10-1000 mkg/ml oldatot. Ezt követően 1-2 térfogat 30-40%-os NaOH/KOH vizes oldatot kell hozzáadni ebbe a lombikba a gyógyszeroldattal együtt, és alaposan el kell keverni.

Az elemzett hatóanyag szabad bázisát fogja kapni, amely a szerves oldószerrétegbe vándorol. Be kell injektálnia 1 mkl hatóanyagoldatot, és el kell kezdenie az analízist.

GC-MS módszerek.
A gyógyszerek széles skálájához:

A 70 eV-on működő GC-MS rendszer elektronionizációs üzemmódban. A készülék 5%-os fenil-metilszilikon kapilláris oszlopot (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m filmvastagság) tartalmaz. Héliumot használunk vivőgázként 1 ml/perc állandó áramlással. A kromatográfiás feltételeket a következőképpen állítottuk be: A kemencehőmérsékletet 2 percig 130 ◦C-on tartottuk, majd 15 ◦C/perc sebességgel 270 ◦C-ra növeltük. A befecskendezőnyílás 270 ◦C-ra van beállítva osztott üzemmódban, 25:1 arányú osztási rátával. A tömegdetektor pásztázó üzemmódban működik (m/z 30-390 közötti pásztázási tartomány).

LSD, NBOMe, NBOH jelek esetén:

A GC-MS rendszer 70 eV-on, elektronionizációs üzemmódban működik. A készülék 5%-os fenil-metilszilikon kapilláris oszlopot tartalmaz (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m filmvastagság). Héliumot használunk vivőgázként 1 ml/perc állandó áramlással. A kromatográfiás feltételeket a következőképpen állítottuk be: A sütő hőmérsékletét 2 percig 40 ◦C-on tartjuk, majd 15 ◦C/perc sebességgel 210 ◦C-ra növeljük, majd 5 ◦C/perc sebességgel 280 ◦C-ra növeljük, és 20 percig tartjuk. A befecskendezőnyílás 280 ◦C-ra van beállítva splitless üzemmódban. A tömegdetektort pásztázó üzemmódban működtettük (m/z 30-450 közötti pásztázási tartomány).

Következtetés:
Mint látható, a minták előkészítése meglehetősen egyszerű. Nincs szükség drága reagensekre vagy bonyolult manipulációkra. Ez az eljárás azonban nagyon fontos ahhoz, hogy releváns elemzési eredményeket kapjunk.

 

[Cocojamba]

Mi a helyzet más GC-MS rendszerekkel? Vagy ezek a módszerek csak Agilent vagy Thermo Scientific készülékekkel működnek?

 

[G.Patton]

Valójában nem, bármelyik rendszert használhatja ugyanazokkal a specifikációkkal.