Introduzione.
L'obiettivo principale di questa ricerca è la valutazione della possibilità di determinare i principali farmaci nei fluidi biologici con metodi espressi pubblicamente disponibili a livello nazionale. Questo articolo risponde alle seguenti domande.
- I test di farmacia per 3-20 dollari rivelano davvero l'uso delle sostanze dichiarate? (Le classiche strisce reattive combinate contengono scale per la determinazione di anfetamina, metanfetamina, cocaina, marijuana, oppiacei).
- Queste strisce reattive possono essere utili per l'alfa-PVP e il mefedrone (non esistono test specializzati in farmacia)?
Il motivo dell'utilizzo dei più comuni test da farmacia, facili da acquistare, è che la ricerca dovrebbe essere utile e avere un'applicazione pratica.
Importante: possono essere utilizzati altri kit di test a flusso laterale (LFT) con etichette diverse; la società produttrice non ha importanza, perché ogni kit di test ha lo stesso meccanismo di funzionamento e ha un'efficacia comparabile.
Informazioni su LFT.
I test a flusso laterale (LFT), noti anche come test immunocromatografici a flusso laterale o test rapidi, sono semplici dispositivi destinati a rilevare la presenza di una sostanza target in un campione liquido senza la necessità di apparecchiature specializzate e costose. Questi test sono ampiamente utilizzati nella diagnostica medica per i test a domicilio, nei punti di assistenza o in laboratorio. Per esempio, il test di gravidanza domiciliare è un LFT che rileva un ormone specifico. Questi test sono semplici, economici e in genere forniscono risultati in circa 5-30 minuti. Molte applicazioni di laboratorio aumentano la sensibilità dei semplici LFT impiegando apparecchiature aggiuntive dedicate.
Gli LFT funzionano secondo gli stessi principi dei test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA). In sostanza, questi test fanno scorrere il campione liquido sulla superficie di un tampone con molecole reattive che mostrano un risultato visivo positivo o negativo. I tamponi si basano su una serie di letti capillari, come pezzi di carta porosa, polimeri microstrutturati o polimeri sinterizzati. Ciascuno di questi tamponi ha la capacità di trasportare spontaneamente un fluido (ad esempio, urina, sangue, saliva).
Il tampone agisce come una spugna e trattiene un eccesso di liquido del campione. Una volta imbevuto, il fluido scorre verso il secondo cuscinetto di coniugazione, in cui il produttore ha immagazzinato particelle bioattive liofilizzate chiamate coniugati (vedi sotto) in una matrice di sale e zucchero. Il cuscinetto dei coniugati contiene tutti i reagenti necessari per una reazione chimica ottimizzata tra la molecola bersaglio (ad esempio, un antigene) e il suo partner chimico (ad esempio, un anticorpo) che è stato immobilizzato sulla superficie della particella. Questi contrassegni marcano le particelle bersaglio mentre passano attraverso il tampone e proseguono verso le linee di test e di controllo. La linea del test mostra un segnale, spesso di colore, come nei test di gravidanza. La linea di controllo contiene ligandi di affinità che indicano se il campione è passato e se le biomolecole nel tampone coniugato sono attive. Dopo aver superato queste zone di reazione, il fluido entra nel materiale poroso finale, lo stoppino, che funge semplicemente da contenitore dei rifiuti.
Gli LFT funzionano secondo gli stessi principi dei test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA). In sostanza, questi test fanno scorrere il campione liquido sulla superficie di un tampone con molecole reattive che mostrano un risultato visivo positivo o negativo. I tamponi si basano su una serie di letti capillari, come pezzi di carta porosa, polimeri microstrutturati o polimeri sinterizzati. Ciascuno di questi tamponi ha la capacità di trasportare spontaneamente un fluido (ad esempio, urina, sangue, saliva).
Il tampone agisce come una spugna e trattiene un eccesso di liquido del campione. Una volta imbevuto, il fluido scorre verso il secondo cuscinetto di coniugazione, in cui il produttore ha immagazzinato particelle bioattive liofilizzate chiamate coniugati (vedi sotto) in una matrice di sale e zucchero. Il cuscinetto dei coniugati contiene tutti i reagenti necessari per una reazione chimica ottimizzata tra la molecola bersaglio (ad esempio, un antigene) e il suo partner chimico (ad esempio, un anticorpo) che è stato immobilizzato sulla superficie della particella. Questi contrassegni marcano le particelle bersaglio mentre passano attraverso il tampone e proseguono verso le linee di test e di controllo. La linea del test mostra un segnale, spesso di colore, come nei test di gravidanza. La linea di controllo contiene ligandi di affinità che indicano se il campione è passato e se le biomolecole nel tampone coniugato sono attive. Dopo aver superato queste zone di reazione, il fluido entra nel materiale poroso finale, lo stoppino, che funge semplicemente da contenitore dei rifiuti.
Esistono due tipi di LFT: il metodo diretto e quello competitivo.
L'LFT diretto (a sandwich) utilizza un coniugato anticorpo-tag applicato su una membrana coniugata. Gli anticorpi specifici per l'analita sono immobilizzati sulla linea del test, mentre gli anticorpi anti-specie specifici per gli anticorpi primari sono immobilizzati sulla linea di controllo. Quando il campione, che contiene una sostanza analizzata, viene applicato alla striscia di test e questo campione colpisce la membrana con il coniugato, l'analita si lega al coniugato AT-tag. Quindi il complesso immunitario entra nella zona del test, dove si lega agli anticorpi specifici, formando un "sandwich" di Ab-Ag-Ab-tag. L'eccesso di coniugato non legato si lega agli anticorpi anti-specie sulla linea di controllo. Pertanto, 2 linee sulla striscia reattiva rappresentano un risultato positivo del test. Se nel campionenon è presente alcuna sostanza analizzata, il coniugato si lega agli anticorpi anti-specie solo sulla linea di controllo, formando una sola linea sulla striscia reattiva. Il metodo LFT diretto è utilizzato per rilevare composti ad alto peso molecolare - virus, compreso l'HIV; vari ormoni (ad esempio, nei test di gravidanza), agenti patogeni di malattie infettive.
Il metodoLFT competitivo, utilizzato per la determinazione di composti a basso peso molecolare, si basa sulla competizione tra l'analita e il coniugato analita:proteina carrier immobilizzata per un numero limitato di siti di legame per gli anticorpi specifici contenuti nel coniugato Ab-tag. Quando viene applicato un campione contenente l'analita, questo si lega al coniugato AT-tag sulla membrana del coniugato. Quindi l'immunocomplesso passa attraverso la zona di test, dove è immobilizzato il coniugato analita/proteina carrier. L'immunocomplesso non può legarsi a questo coniugato a causa di ostacoli sterici: i composti a basso peso molecolare hanno solitamente un solo determinante antigenico e, di conseguenza, gli anticorpi hanno un solo sito di legame con l'antigene, che è già occupato dall'analita. Successivamente, l'immunocomplesso viene legato da anticorpi anti-specie sulla linea di controllo. Di conseguenza, l'assenza di una banda colorata nella zona del test e la presenza di un colore nella zona di controllo indicano che la concentrazione dell'analita nel campione in esame supera il valore soglia per questo test.
Se il campione non è analizzato, il coniugato Ab-tag si lega al coniugato Ag:proteina carrier immobilizzato nella zona della linea di test. Il coniugato Ab-tag non legato entra nella zona della linea di controllo e vi si lega con gli anticorpi anti-specie. Pertanto, la presenza di due linee colorate (test e controllo) rappresenta un risultato negativo dell'analisi.
Il formato LFT competitivo viene utilizzato per rilevare composti a basso peso molecolare, compresi i metaboliti di composti stupefacenti nelle urine, nel fluido orale e negli estratti di tessuto.
Il metodoLFT competitivo, utilizzato per la determinazione di composti a basso peso molecolare, si basa sulla competizione tra l'analita e il coniugato analita:proteina carrier immobilizzata per un numero limitato di siti di legame per gli anticorpi specifici contenuti nel coniugato Ab-tag. Quando viene applicato un campione contenente l'analita, questo si lega al coniugato AT-tag sulla membrana del coniugato. Quindi l'immunocomplesso passa attraverso la zona di test, dove è immobilizzato il coniugato analita/proteina carrier. L'immunocomplesso non può legarsi a questo coniugato a causa di ostacoli sterici: i composti a basso peso molecolare hanno solitamente un solo determinante antigenico e, di conseguenza, gli anticorpi hanno un solo sito di legame con l'antigene, che è già occupato dall'analita. Successivamente, l'immunocomplesso viene legato da anticorpi anti-specie sulla linea di controllo. Di conseguenza, l'assenza di una banda colorata nella zona del test e la presenza di un colore nella zona di controllo indicano che la concentrazione dell'analita nel campione in esame supera il valore soglia per questo test.
Se il campione non è analizzato, il coniugato Ab-tag si lega al coniugato Ag:proteina carrier immobilizzato nella zona della linea di test. Il coniugato Ab-tag non legato entra nella zona della linea di controllo e vi si lega con gli anticorpi anti-specie. Pertanto, la presenza di due linee colorate (test e controllo) rappresenta un risultato negativo dell'analisi.
Il formato LFT competitivo viene utilizzato per rilevare composti a basso peso molecolare, compresi i metaboliti di composti stupefacenti nelle urine, nel fluido orale e negli estratti di tessuto.
Spiegazione più semplice.
Se non capite, ve lo spiego in modo più semplice. All'inizio di ogni striscia reattiva sono presenti anticorpi etichettati. A causa della struttura della striscia reattiva, l'urina si diffonde lungo di essa, trasportando i complessi risultanti nell'area del test, dove vengono fissati i legamenti farmaco-proteina. Poiché l'anticorpo dell'immunocomplesso arrivato è già stato assorbito dal farmaco dall'urina, non può attaccarsi nella zona del test e si sposta ulteriormente nella zona di controllo, dove si lega all'anticorpo anti-specie, colorando una striscia sulla scala (risultato positivo).
Se non c'è droga nel campione biologico, gli anticorpi si muovono nell'urina lungo la striscia del test, rimanendo liberi. Quando il complesso anticorpo-proteina si incontra nella zona del test, alcuni anticorpi marcati vi si attaccano (compare la prima striscia), il resto si sposta con il flusso dell'urina nella zona di controllo, dove si lega anch'esso all'anticorpo anti-specie, evidenziando la seconda striscia (2 strisce - risultato negativo). Se la linea appare nella zona del test ma non nella zona di controllo (dovrebbe sempre apparire), il test è difettoso.
Se non c'è droga nel campione biologico, gli anticorpi si muovono nell'urina lungo la striscia del test, rimanendo liberi. Quando il complesso anticorpo-proteina si incontra nella zona del test, alcuni anticorpi marcati vi si attaccano (compare la prima striscia), il resto si sposta con il flusso dell'urina nella zona di controllo, dove si lega anch'esso all'anticorpo anti-specie, evidenziando la seconda striscia (2 strisce - risultato negativo). Se la linea appare nella zona del test ma non nella zona di controllo (dovrebbe sempre apparire), il test è difettoso.
Le sostanze sono state utilizzate da volontari che non hanno assunto nulla di psicoattivo per un periodo di tempo sufficiente; per la loro analisi è stata prelevata l'urina. Ecco i risultati dell'esperimento.
Esperimenti.
AMFETAMINAPrincipali metaboliti: anfetamina, 4-idrossi-anfetamina, 4-idrossinorefedrina, 4-idrossifenilacetone, acido benzoico, acido ippurico, norefedrina, fenilacetone.
COCAINA.
Metaboliti principali: benzoilecgonina, ecgonina metil estere, ecgonina, norcocaina, p-idrossicaina, m-idrossicaina, p-idrossibenzoilecgonina, m-idrossibenzoilecgonina.
Se si osserva il test sulla destra, si capisce perché le strisce reattive devono essere gestite con un punto di vista critico. La persona sottoposta al test non ha fatto recentemente uso di PAS, ad eccezione della cocaina.
EROINA.
Principali metaboliti: morfina, normorfina, idromorfone.
MDMA / ECSTASY.
Metaboliti principali: 3,4-metilendiossimetanfetamina (MDMA), 3,4-metilendiossiamfetamina (MDA), 4-idrossi-3-metossimetanfetamina (HMMA), 4-idrossi-3-metossiamfetamina (HMA).
Sono disponibili strisce reattive per MDMA / Ecstasy, ma sono più difficili da trovare. L'anfetamina e la metanfetamina sono state trovate nelle urine. Ciò si spiega con la loro comune appartenenza alla stessa classe e, di conseguenza, con la somiglianza strutturale delle sostanze e dei loro metaboliti. Le scale di THC (cannabinoidi) e OPI (oppiacei) del secondo test non partecipano all'esperimento (non attivate). Secondo la foto di sinistra, queste sostanze non vengono rilevate in relazione all'uso di MDMA.
MEFEDRONE.
Metaboliti principali: mefedrone, nor-mefedrone, 4'-carbossi-mefedrone, 1'-diidro-mefedrone, N-succinil-nor-mefedrone.
Un interessante commento dei redattori del sito https://www.zoomtesting.co.uk:"Alcuni venditori sottolineano che un test per la metanfetamina può essere usato per rilevare il mefedrone. Tuttavia, questo non è corretto. La struttura chimica della metanfetamina e del mefedrone è diversa, quindi il test della metanfetamina non è valido per il mefedrone". Bene, verifichiamo.
Oltre alle sostanze standard, è stata utilizzata un'altra striscia reattiva per testare i barbiturici. È chiaro che c'è qualcosa di sbagliato in questa striscia. Il test è stato ripetuto da un altro volontario che non aveva mai fatto uso di barbiturici o di preparati che li contenevano, con un risultato simile.
ALPHA-PVP (alfa-pirrolidinovalerofenone).
La seconda linea nella finestra PCP è quasi completamente assente.
MARIJUANA.
Principali metaboliti: tetraidrocannabinolo (THC), 11-idrossi-THC, 11-nor-9-carbossi-THC. Cannabis ben determinata e sempre e solo nella sua finestra "THC" (tetraidrocannabinolo), è sufficiente dimostrare sul test più semplice.
Conclusione.
I test rilevano le droghe nei fluidi corporei da molto più tempo rispetto all'effetto psicoattivo. Sono abbastanza economici, hanno una buona sensibilità e sono solo marginalmente inferiori ai metodi utilizzati in laboratorio. Ricordate la vostra sicurezza: se è necessario controllare personalmente la vostra "pulizia", i test express saranno indispensabili.
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