Įvadas: Įvadas.
Pagrindinis šio tyrimo tikslas - įvertinti galimybę nustatyti pagrindinius vaistus biologiniuose skysčiuose namuose viešai prieinamais ekspres metodais. Šiame straipsnyje atsakoma į šiuos klausimus.
- Ar vaistinėje atliktas 3-20 JAV dolerių testas tikrai atskleidžia deklaruojamų medžiagų vartojimo faktą? (Klasikinėse kombinuotose testų juostelėse yra amfetamino, metamfetamino, kokaino, marihuanos, opiatų nustatymo skalės).
- Ar šios testo juostelės gali būti naudingos alfa-pvp ir mefedronui nustatyti? (Vaistinėse nėra specializuotų testų).
Priežastis, dėl kurios naudojami labiausiai paplitę vaistinėse lengvai įsigyjami testai, yra ta, kad tyrimas turėtų būti naudingas ir turėti praktinį pritaikymą.
Svarbu: gali būti naudojami ir kiti šoninio srauto testų (ŠKS) rinkiniai su skirtingomis etiketėmis, gamintojo kompanija nesvarbi, nes bet kurios testų juostelės turi tą patį veikimo mechanizmą ir yra panašiai veiksmingos.
Apie LFT.
Šoninio srauto testai (ŠST), dar vadinami šoninio srauto imunochromatografiniais testais arba greitaisiais testais, yra paprasti prietaisai, skirti nustatyti tikslinės medžiagos buvimą skystame mėginyje nenaudojant specializuotos ir brangios įrangos. Šie testai plačiai naudojami medicininėje diagnostikoje, atliekant tyrimus namuose, sveikatos priežiūros vietoje arba laboratorijoje. Pavyzdžiui, nėštumo testas namuose yra LFT, kuriuo nustatomas konkretus hormonas. Šie testai yra paprasti, ekonomiški ir paprastai rezultatus parodo maždaug per 5-30 minučių. Daugelyje laboratorijoje naudojamų programų paprastų LFT jautrumas padidinamas naudojant papildomą specialią įrangą.
LFT veikia tais pačiais principais kaip ir fermentiniai imunosorbentiniai tyrimai (ELISA). Iš esmės, atliekant šiuos tyrimus skystas mėginys paleidžiamas išilgai padėkliuko paviršiaus su reaktyviomis molekulėmis, kurios vizualiai parodo teigiamą arba neigiamą rezultatą. Tamponėlių pagrindą sudaro kapiliariniai sluoksniai, pavyzdžiui, akyto popieriaus, mikrostruktūrinio polimero ar sukepinto polimero gabalėliai. Kiekvienas iš šių padėkliukų gali savaime pernešti skystį (pvz., šlapimą, kraują, seiles).
Mėginio pagalvėlė veikia kaip kempinė ir sulaiko mėginio skysčio perteklių. Įmirkęs skystis teka į antrąjį konjugato padėkliuką, kuriame gamintojas druskos ir cukraus matricoje yra sukaupęs liofilizuotų biologiškai aktyvių dalelių, vadinamų konjugatais (žr. toliau). Konjugato padėkle yra visi reagentai, reikalingi optimaliai cheminei reakcijai tarp tikslinės molekulės (pvz., antigeno) ir jos cheminio partnerio (pvz., antikūno), kuris buvo imobilizuotas dalelės paviršiuje. Šie ženklai žymi tikslines daleles, kai jos praeina pro padėkliuką ir toliau pereina į bandomąją ir kontrolinę linijas. Testo linija rodo signalą, dažnai spalvotą, kaip nėštumo testuose. Kontrolinėje linijoje yra giminingų ligandų, kurie parodo, ar mėginys prasiskverbė ir ar konjuguotame padėkle esančios biomolekulės yra aktyvios. Praėjęs šias reakcijos zonas, skystis patenka į galutinę akytą medžiagą - dagtį, kuris tiesiog atlieka atliekų talpyklos funkciją.
LFT veikia tais pačiais principais kaip ir fermentiniai imunosorbentiniai tyrimai (ELISA). Iš esmės, atliekant šiuos tyrimus skystas mėginys paleidžiamas išilgai padėkliuko paviršiaus su reaktyviomis molekulėmis, kurios vizualiai parodo teigiamą arba neigiamą rezultatą. Tamponėlių pagrindą sudaro kapiliariniai sluoksniai, pavyzdžiui, akyto popieriaus, mikrostruktūrinio polimero ar sukepinto polimero gabalėliai. Kiekvienas iš šių padėkliukų gali savaime pernešti skystį (pvz., šlapimą, kraują, seiles).
Mėginio pagalvėlė veikia kaip kempinė ir sulaiko mėginio skysčio perteklių. Įmirkęs skystis teka į antrąjį konjugato padėkliuką, kuriame gamintojas druskos ir cukraus matricoje yra sukaupęs liofilizuotų biologiškai aktyvių dalelių, vadinamų konjugatais (žr. toliau). Konjugato padėkle yra visi reagentai, reikalingi optimaliai cheminei reakcijai tarp tikslinės molekulės (pvz., antigeno) ir jos cheminio partnerio (pvz., antikūno), kuris buvo imobilizuotas dalelės paviršiuje. Šie ženklai žymi tikslines daleles, kai jos praeina pro padėkliuką ir toliau pereina į bandomąją ir kontrolinę linijas. Testo linija rodo signalą, dažnai spalvotą, kaip nėštumo testuose. Kontrolinėje linijoje yra giminingų ligandų, kurie parodo, ar mėginys prasiskverbė ir ar konjuguotame padėkle esančios biomolekulės yra aktyvios. Praėjęs šias reakcijos zonas, skystis patenka į galutinę akytą medžiagą - dagtį, kuris tiesiog atlieka atliekų talpyklos funkciją.
Yra du LFT tipai: tiesioginis ir konkurencinis metodas.
Tiesioginiame (sumuštiniame) LFT naudojamas antikūno ir žymeklio konjugatas, užkrėstas ant konjuguotos membranos. Šiai analitei būdingi antikūnai imobilizuojami ant tiriamosios linijos, o ant kontrolinės linijos imobilizuojami pirminiams antikūnams būdingi antikūnai. Kai mėginys, kuriame yra analizuojamos medžiagos, užtepamas ant tiriamosios juostelės ir šis mėginys patenka ant membranos su konjugatu, analitė prisijungia prie AT žymeklio konjugato. Tuomet imuninis kompleksas patenka į bandymo juostelę, kur jis jungiasi su specifiniais antikūnais, sudarydamas Ab-Ag-Ab-tag "sumuštinį". Nesusijungusio konjugato perteklius jungiasi su kontrolinėje linijoje esančiais antikūnais prieš rūšį. Todėl 2 linijos ant testo juostelės reiškia teigiamą tyrimo rezultatą. Jei mėginyjenėra tiriamos medžiagos, konjugatas jungiasi su prieš rūšinius antikūnus tik kontrolinėje linijoje, todėl testo juostelėje susidaro viena linija. Tiesioginis LFT metodas naudojamas didelės molekulinės masės junginiams - virusams, įskaitant ŽIV, įvairiems hormonams (pavyzdžiui, nėštumo testuose), infekcinių ligų sukėlėjams - nustatyti.
Konkurencinis LFT metodas, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams nustatyti, yra pagrįstas analitės ir imobilizuoto analitės ir baltymo nešiklio konjugato konkurencija dėl riboto skaičiaus specifinių antikūnų, esančių Ab-žymeklio konjugate, prisijungimo vietų. Užtepus mėginį, kuriame yra analitės, ji jungiasi su AT žymeklio konjugatu ant konjugato membranos. Tuomet imuninis kompleksas pereina per bandymo zoną, kurioje imobilizuojamas analitės ir nešančiojo baltymo konjugatas. Imunokompleksas negali susijungti su šiuo konjugatu dėl sterinių kliūčių: mažos molekulinės masės junginiai paprastai turi vieną antigeninį determinantą ir atitinkamai antikūnai turi vieną antigeno prisijungimo vietą, kuri jau yra užimta analitės. Toliau imuninis kompleksas jungiasi su kontrolinės linijos antikūnais prieš rūšį. Dėl to spalvotos juostos nebuvimas tiriamojoje zonoje ir spalvos buvimas kontrolinėje zonoje rodo, kad analitės koncentracija tiriamajame mėginyje viršija šiam tyrimui nustatytą ribinę vertę.
Jei mėginyje analizuojamos medžiagos nėra, Ab-žymės konjugatas jungiasi su Ag:nešiklio baltymo konjugatu, imobilizuotu bandomosios linijos zonoje. Nesusijęs Ab žymės konjugatas patenka į kontrolinės linijos zoną ir joje susijungia su prieš rūšinius antikūnus. Taigi, dviejų spalvotų linijų (testo ir kontrolinės) buvimas reiškia neigiamą analizės rezultatą.
Konkurencinis LFT formatas naudojamas mažos molekulinės masės junginiams, įskaitant narkotinių junginių metabolitus, šlapime, burnos skystyje ir audinių ekstraktuose aptikti.
Konkurencinis LFT metodas, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams nustatyti, yra pagrįstas analitės ir imobilizuoto analitės ir baltymo nešiklio konjugato konkurencija dėl riboto skaičiaus specifinių antikūnų, esančių Ab-žymeklio konjugate, prisijungimo vietų. Užtepus mėginį, kuriame yra analitės, ji jungiasi su AT žymeklio konjugatu ant konjugato membranos. Tuomet imuninis kompleksas pereina per bandymo zoną, kurioje imobilizuojamas analitės ir nešančiojo baltymo konjugatas. Imunokompleksas negali susijungti su šiuo konjugatu dėl sterinių kliūčių: mažos molekulinės masės junginiai paprastai turi vieną antigeninį determinantą ir atitinkamai antikūnai turi vieną antigeno prisijungimo vietą, kuri jau yra užimta analitės. Toliau imuninis kompleksas jungiasi su kontrolinės linijos antikūnais prieš rūšį. Dėl to spalvotos juostos nebuvimas tiriamojoje zonoje ir spalvos buvimas kontrolinėje zonoje rodo, kad analitės koncentracija tiriamajame mėginyje viršija šiam tyrimui nustatytą ribinę vertę.
Jei mėginyje analizuojamos medžiagos nėra, Ab-žymės konjugatas jungiasi su Ag:nešiklio baltymo konjugatu, imobilizuotu bandomosios linijos zonoje. Nesusijęs Ab žymės konjugatas patenka į kontrolinės linijos zoną ir joje susijungia su prieš rūšinius antikūnus. Taigi, dviejų spalvotų linijų (testo ir kontrolinės) buvimas reiškia neigiamą analizės rezultatą.
Konkurencinis LFT formatas naudojamas mažos molekulinės masės junginiams, įskaitant narkotinių junginių metabolitus, šlapime, burnos skystyje ir audinių ekstraktuose aptikti.
Paprastesnis paaiškinimas.
Jei nesuprantate, paaiškinčiau paprasčiau. Kiekvienos testo juostelės pradžioje yra pažymėti antikūnai. Dėl testo juostelės struktūros šlapimas pasklinda išilgai jos, pernešdamas susidariusius kompleksus į testo sritį, kurioje fiksuojami narkotikų ir baltymų raiščiai. Kadangi atvykusio imuninio komplekso antikūnas iš šlapimo jau yra perėmęs narkotiką, jis negali prisitvirtinti testo zonoje ir keliauja toliau į kontrolinę zoną, kur susijungia su antikūnu prieš rūšį, nuspalvindamas vieną juostelę ant skalės (teigiamas rezultatas).
Jei biologiniame mėginyje nėra narkotikų, antikūnai juda šlapime išilgai testo juostelės ir lieka laisvi. Kai antikūnų ir baltymų kompleksas susitinka testo zonoje, prie jo prisijungia dalis pažymėtų antikūnų (atsiranda pirmoji juostelė), likusi dalis juda su šlapimo srautu kontrolinėje zonoje, kur taip pat prisijungia prie prieš rūšį nukreipto antikūno, nuspalvinant antrąją juostelę (2 juostelės - neigiamas rezultatas). Jei juostelė atsiranda testo zonoje, bet neatsiranda kontrolinėje zonoje (turėtų atsirasti visada) - testas yra klaidingas.
Jei biologiniame mėginyje nėra narkotikų, antikūnai juda šlapime išilgai testo juostelės ir lieka laisvi. Kai antikūnų ir baltymų kompleksas susitinka testo zonoje, prie jo prisijungia dalis pažymėtų antikūnų (atsiranda pirmoji juostelė), likusi dalis juda su šlapimo srautu kontrolinėje zonoje, kur taip pat prisijungia prie prieš rūšį nukreipto antikūno, nuspalvinant antrąją juostelę (2 juostelės - neigiamas rezultatas). Jei juostelė atsiranda testo zonoje, bet neatsiranda kontrolinėje zonoje (turėtų atsirasti visada) - testas yra klaidingas.
Medžiagas vartojo savanoriai, kurie pakankamą laiką nevartojo nieko psichoaktyvaus, jų tyrimui buvo paimtas šlapimas. Pateikiame eksperimento rezultatus.
Eksperimentų rezultatai.
AMFETAMINASPagrindiniai metabolitai: amfetaminas, 4-hidroksiamfetaminas, 4-hidroksinorefedrinas, 4-hidroksifenilacetonas, benzenkarboksirūgštis, hipuro rūgštis, norefedrinas, fenilacetonas.
KOKAINAS.
Pagrindiniai metabolitai: benzoilekgoninas, ekgonino metilo esteris, ekgoninas, norkokainas, p-hidroksikainas, m-hidroksikainas, p-hidroksibenzoilekgoninas, m-hidroksibenzoilekgoninas, m-hidroksibenzoilekgoninas.
Jei pažvelgsite į dešinėje esantį testą, suprasite, kodėl su testo juostelėmis reikia elgtis kritiškai. Tiriamasis asmuo pastaruoju metu nevartojo jokio PAS, išskyrus kokainą.
HEROINAS.
Pagrindiniai metabolitai: morfinas, normorfinas, hidromorfonas.
MDMA / EKSTAZI.
Pagrindiniai metabolitai: 3,4-metilendioksimetamfetaminas (MDMA), 3,4-metilendioksiamfetaminas (MDA), 4-hidroksi-3-metoksimetamfetaminas (HMMA), 4-hidroksi-3-metoksiamfetaminas (HMA).
Yra MDMA / ekstazio testų juostelių, tačiau jų sunkiau rasti. Šlapime rasta amfetamino ir metamfetamino. Tai paaiškinama bendru jų priklausymu tai pačiai klasei ir atitinkamai medžiagų bei jų metabolitų struktūriniu panašumu. THC (kanabinoidai) ir OPI (opiatai) svarstyklės antrajame teste eksperimente nedalyvauja (neaktyvuotos). Pagal kairiąją nuotrauką šios medžiagos neaptinkamos ryšium su MDMA vartojimu.
MEFEDRONAS.
Pagrindiniai metabolitai: mefedronas, nor-mefedronas, 4'-karboksi-mefedronas, 1'-dihidro-mefedronas, N-sukcinil-nor-mefedronas.
Įdomus svetainės https://www.zoomtesting.co.uk redaktorių komentaras :"Kai kurie pardavėjai nurodo, kad mefedronui aptikti galima naudoti metamfetamino testą. Tačiau tai neteisinga. Cheminė metamfetamino ir mefedrono struktūra skiriasi, todėl metamfetamino testas nebus tinkamas mefedronui nustatyti". Ką gi, patikrinkime tai.
Be standartinių medžiagų, dar viena testo juostelė buvo naudojama barbitūratams tirti. Akivaizdu, kad su šia testo juostele kažkas negerai. Testą pakartojo kitas savanoris, niekada nevartojęs barbitūratų ar jų turinčių preparatų, ir rezultatas buvo panašus.
ALFA-PVP (alfa-pirolidinovalerofenonas).
Antrosios eilutės PCP lange beveik nėra.
MARIJUANA.
Pagrindiniai metabolitai: tetrahidrokanabinolis (THC), 11-hidroksi-THC, 11-nor-9-karboksi-THC. Kanapės gerai nustatomos ir visada tik jų lange "THC" (tetrahidrokanabinolis), jį pakanka įrodyti paprasčiausiu testu.
Išvada.
Testais narkotikai organizmo skysčiuose aptinkami daug ilgiau, nei jaučiamas jų psichoaktyvus poveikis. Jie yra gana pigūs, pasižymi geru jautrumu ir tik nežymiai nusileidžia laboratorijoje naudojamiems metodams. Nepamirškite savo saugumo - jei reikės patiems pasitikrinti savo "švarą", greitieji testai bus nepakeičiami.
Last edited by a moderator: