Crispr metodikos, nors ir naudingos bei labai paprastos naudoti įšventintiems asmenims, vis dėlto yra labai sudėtingos. Ar turite patirties sintetinės biologijos srityje? Ar žinote, kokie skirtingi geno sudėtyje esantys elementai lemia jo raiškos intensyvumą ir sąlygas? Ką žinote apie genetinį kodą, kodonų optimizavimą, pradmenų kūrimą, klonavimo ir raiškos vektorius, CRISPR-Cas9 komplekso struktūrą? Tai ne atsitiktiniai žodžiai, tai sąvokos, kurias turėsite visiškai įsisavinti prieš sėkmingai transfekcionuodami žinduolio ląstelę, jau nekalbant apie savo ląstelę.
Norėdami gauti norimą geną, pirmiausia turėsite genų duomenų bazėje surasti jo seką (tai labai paprasta ir laisvai prieinama internete), taip pat tinkamą promotorių, suklijuoti šiuos du elementus kartu, taip pat PGR pradmenis (su restrikcijos vietomis, kad būtų galima virškinti restrikcijos fermentais) ir nusiųsti tai pagal užsakymą DNR sintezės įmonei. Jų yra daugybė, kai kurios jų yra daug pigesnės už kitas.
Kitu atveju galite nusipirkti tik promotoriaus grandinę ir gauti jus dominantį geną PGR būdu iš natūralaus šaltinio arba nusipirkti tiesiogiai geną, jei jis yra įprastas, pavyzdžiui, luciferazės sistema (bet kodėl norėtumėte švytėti tamsoje lol).
Tada galite įterpti jį į CRISPR plazmidę ir atitinkamą kreipiančiąją grandinę, kad genas būtų nukreiptas į konkrečią genomo vietą.
Galite pasižiūrėti youtube kanalą "the thought emporium", kuris atliko tokį eksperimentą su savimi, bet PRAŠOME prieš pradėdami įgyvendinti savo projektą jį ištirti bent keletą metų.