GC-MS metodes zālēm

[G.Patton]

Ievads:

Man ir plaša pieredze zāļu kvalitātes noteikšanā ar hromatogrāfijas un masas spektrometrijas metodi. Es nolēmu uzrakstīt šo instrukciju ķīmiķiem, kuri vēlas sākt zāļu testēšanu ar GC-MS iekārtām.
Neraugoties uz plašām hromatogrāfijas-masspektrometrijas iespējām, pastāv ierobežotas iespējas. Ar masas detektoru tandēmā ar hromatogrāfu nevar noteikt neorganiskās vielas, organiskās vielas, kuru molekulmasa pārsniedz 450 Da, vai organiskās vielas ar augstu viršanas temperatūru (>350 ◦C).

Aprīkojuma īpašības:

Vispirms ir jānosaka, kādas ir jūsu iespējas veikt analīzes, izmantojot gāzu hromatogrāfu. Šiem mērķiem var izmantot populārākās atbilstošās GC-MS sistēmas, piemēram, Agilent 7890 gāzu hromatogrāfu, kas savienots ar Agilent 5975C kvadrupola masas detektoru, vai Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole GC-MS. Galvenā īpašība, kas jums jāzina, ir kapilārās kolonnas polaritāte. Lielākajai daļai zāļu nepieciešama nepolaritātes vai vāji polāra kapilārā kolonna. Piemēram, HP-1/DB-1 vai HP-5/DB-5 ir vislabākā izvēle dažādiem lietojumiem. Turklāt jums jāzina arī masas diapazons, ko jūsu masas detektors var noteikt SCAN režīmā. Parasti nepieciešams 30-450 m/z diapazons, ar to pietiek, lai noteiktu visu veidu zāles. Lielāko daļu no tām var noteikt 30-350 m/z robežās.

Parauga sagatavošanas procedūra:

Visas zāles ir sāls formā, jo tās ir stabilākas, kas ļauj tās ilgstoši uzglabāt bez strukturālām izmaiņām. Piemēram, amfetamīnam ir slāpekļa atoms, tas ir bāze, kas saistās ar skābes jonu(-iem) kā 2-(SO4), -Cl, 3-(PO4). Jums ir jāiegūst analīzes vielas brīvā bāze. Arī tad, ja jūs nezināt, kāda viela jums ir analīzes viela, jums ir jāveic eksperiments kvalitatīvai noteikšanai, izmantojot reaģentus, kurus es minēju iepriekš(Narkotiku testēšanas reaģenti).

Universālo preparātu sagatavošana būs diezgan vienkārša. Ievietojiet parauga alikvotu kolbā un piepildiet to ar tīru šķīdinātāju (CCl4/ CH2Cl2). Sagatavojiet aptuveni 10-1000 mkg/ml šķīduma. Lielāko daļu narkotisko vielu nevar izšķīdināt tetrahloroglekļa tetrahlorīdā/dihlormetānā. Pēc tam šajā kolbā ar narkotiku šķīdumu jāpievieno 1-2 tilpumi 30-40 % NaOH/KOH ūdens šķīduma un tas rūpīgi jāsajauc.

Gandrīz tādu pašu preparātu izmanto zīmēm(LSD, NBOMe, NBOH u. c.) . Ņem zīmi ar deklarēto vielas daudzumu un sagriež to kolbā, pievieno tīru šķīdinātāju (ieteicams CH2Cl2). Sagatavojiet aptuveni 10-1000 mkg/ml šķīduma. Pēc tam šajā kolbā ar zāļu šķīdumu jāpievieno 1-2 tilpumi 30-40 % NaOH/KOH ūdens šķīduma un tas rūpīgi jāsajauc.

Iegūsiet analizējamo zāļu brīvu bāzi, kas migrēs uz organiskā šķīdinātāja slāni. Jāievada 1 mkl zāļu šķīduma un jāsāk analīze.

GC-MS metodes.
Plašam zāļu klāstam:

GC-MS sistēma darbojas 70 eV elektronu jonizācijas režīmā. Aparāts ir aprīkots ar 5% fenilmetilsilikona kapilāro kolonnu (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m plēves biezums). Kā nesējgāzi izmanto hēliju ar konstantu plūsmu 1 ml/min. Hromatogrāfijas apstākļi bija šādi: Temperatūru krāsnī 2 minūtes uzturēja 130 ◦C temperatūrā, tad paaugstināja līdz 270 ◦C ar ātrumu 15 ◦C/min. Injekcijas pieslēgvieta iestatīta 270 ◦C temperatūrā sadalīšanas režīmā ar sadalīšanas raito 25:1. Masas detektors darbojas skenēšanas režīmā (skenēšanas diapazons no m/z 30-390).

LSD, NBOMe, NBOH zīmēm:

GC-MS sistēma darbojas 70 eV elektronu jonizācijas režīmā. Aparāts ir aprīkots ar 5 % fenilmetilsilikona kapilāro kolonnu (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m plēves biezums). Kā nesējgāzi izmanto hēliju ar konstantu plūsmu 1 ml/min. Hromatogrāfijas apstākļi ir šādi: Temperatūra krāsnī 2 min. tiek uzturēta 40 ◦C temperatūrā, tad paaugstināta līdz 210 ◦C ar ātrumu 15 ◦C/min, pēc tam paaugstināta līdz 280 ◦C ar ātrumu 5 ◦C/min un uzturēta 20 min. Iesmidzināšanas ports iestatīts 280 ◦C temperatūrā bez sadalīšanas režīmā. Masas detektors darbojās skenēšanas režīmā (skenēšanas diapazons no m/z 30-450).

Secinājums:
Kā redzams, paraugu sagatavošana ir diezgan vienkārša. Tam nav vajadzīgi dārgi reaģenti vai sarežģītas manipulācijas. Tomēr šī procedūra ir ļoti svarīga, lai iegūtu atbilstošus analīžu rezultātus.

 

[Cocojamba]

Kā ir ar citām GC-MS sistēmām? Vai šīs metodes darbojas tikai ar Agilent vai Thermo Scientific?

 

[G.Patton]

Patiesībā nē, jūs varat izmantot jebkuru sistēmu ar tādām pašām specifikācijām.