As metodologias Crispr, embora úteis e muito simples de usar para os iniciados, ainda são muito complexas. Você tem alguma experiência em biologia sintética? Você conhece os diferentes elementos presentes em um gene que determinam a intensidade e as condições em que ele é expresso? O que você sabe sobre o código genético, a otimização de códons, o design de primers, a clonagem e os vetores de expressão, a estrutura do complexo CRISPR-Cas9? Essas não são palavras aleatórias, são todos conceitos que você precisará dominar completamente antes de transfectar com sucesso uma célula de mamífero, muito menos a sua própria.
Para obter o gene desejado, primeiro é preciso encontrar a sequência dele em um banco de dados de genes, o que é muito fácil e está disponível gratuitamente on-line, bem como um promotor adequado, colar esses dois elementos e os primers de PCR (com locais de restrição para digestão por enzimas de restrição) e enviá-los a uma empresa de síntese de DNA personalizada. Há várias delas, algumas são muito mais baratas do que outras.
Caso contrário, você poderia comprar apenas a fita promotora e obter o gene de interesse por PCR de uma fonte natural ou comprar o gene diretamente se for um gene comum, como o sistema de luciferase (mas por que você iria querer brilhar no escuro?)
Em seguida, você pode inseri-lo em um plasmídeo CRISPR, bem como em uma cadeia-guia apropriada para atingir um local específico no genoma.
Você pode procurar o canal do YouTube "the thought emporium", que fez esse experimento em si mesmo, mas POR FAVOR, pesquise seu projeto por PELO MENOS ALGUNS ANOS antes de levá-lo adiante