Introdução.
O principal objetivo desta investigação é avaliar a possibilidade de determinar os principais fármacos em fluidos biológicos através de métodos expressos disponíveis publicamente em casa. Este artigo responde às seguintes questões.
- Os testes de farmácia para $3-20 revelam realmente o facto de se utilizarem as substâncias declaradas? (As tiras de teste combinadas clássicas contêm escalas para a determinação de anfetaminas, metanfetaminas, cocaína, marijuana e opiáceos).
- Poderão estas tiras-teste ser úteis para o Alfa-PVP e a Mefedrona? (Não existem testes especializados nas farmácias)
A razão para usar o teste de farmácia mais comum, que é fácil de comprar, é que a investigação deve ser útil e ter aplicação prática.
Importante: podem ser utilizados outros kits de testes de fluxo lateral (LFT) com rótulos diferentes. A empresa fabricante é indiferente, uma vez que qualquer kit de teste tem o mesmo mecanismo de funcionamento e uma eficácia comparável.
Sobre o LFT.
Os testes de fluxo lateral (LFT), também conhecidos como ensaios imunocromatográficos de fluxo lateral ou testes rápidos, são dispositivos simples destinados a detetar a presença de uma substância-alvo numa amostra líquida sem necessidade de equipamento especializado e dispendioso. Estes testes são amplamente utilizados em diagnósticos médicos para testes ao domicílio, testes no local de prestação de cuidados ou utilização em laboratório. Por exemplo, o teste de gravidez caseiro é um LFT que detecta uma hormona específica. Estes testes são simples, económicos e geralmente apresentam resultados em cerca de cinco a 30 minutos. Muitas aplicações laboratoriais aumentam a sensibilidade dos testes simples de função hepática através da utilização de equipamento adicional dedicado.
Os testes LFT funcionam segundo os mesmos princípios que os ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA). Essencialmente, estes testes fazem correr a amostra líquida ao longo da superfície de um bloco com moléculas reactivas que apresentam um resultado visual positivo ou negativo. As almofadas baseiam-se numa série de leitos capilares, tais como pedaços de papel poroso, polímero microestruturado ou polímero sinterizado. Cada uma destas almofadas tem a capacidade de transportar espontaneamente fluidos (por exemplo, urina, sangue, saliva).
A almofada de amostra actua como uma esponja e retém um excesso de fluido de amostra. Uma vez embebido, o fluido flui para a segunda almofada de conjugado, na qual o fabricante armazenou partículas bioactivas liofilizadas chamadas conjugados (ver abaixo) numa matriz de sal e açúcar. O bloco de conjugados contém todos os reagentes necessários para uma reação química optimizada entre a molécula alvo (por exemplo, um antigénio) e o seu parceiro químico (por exemplo, anticorpo) que foi imobilizado na superfície da partícula. Estas marcas marcam as partículas alvo à medida que estas passam através da almofada e continuam para as linhas de teste e de controlo. A linha de teste apresenta um sinal, frequentemente uma cor, como nos testes de gravidez. A linha de controlo contém ligandos de afinidade que indicam se a amostra foi atravessada e se as biomoléculas no bloco conjugado estão activas. Depois de passar por estas zonas de reação, o fluido entra no material poroso final, o pavio, que funciona simplesmente como um recipiente de resíduos.
Os testes LFT funcionam segundo os mesmos princípios que os ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA). Essencialmente, estes testes fazem correr a amostra líquida ao longo da superfície de um bloco com moléculas reactivas que apresentam um resultado visual positivo ou negativo. As almofadas baseiam-se numa série de leitos capilares, tais como pedaços de papel poroso, polímero microestruturado ou polímero sinterizado. Cada uma destas almofadas tem a capacidade de transportar espontaneamente fluidos (por exemplo, urina, sangue, saliva).
A almofada de amostra actua como uma esponja e retém um excesso de fluido de amostra. Uma vez embebido, o fluido flui para a segunda almofada de conjugado, na qual o fabricante armazenou partículas bioactivas liofilizadas chamadas conjugados (ver abaixo) numa matriz de sal e açúcar. O bloco de conjugados contém todos os reagentes necessários para uma reação química optimizada entre a molécula alvo (por exemplo, um antigénio) e o seu parceiro químico (por exemplo, anticorpo) que foi imobilizado na superfície da partícula. Estas marcas marcam as partículas alvo à medida que estas passam através da almofada e continuam para as linhas de teste e de controlo. A linha de teste apresenta um sinal, frequentemente uma cor, como nos testes de gravidez. A linha de controlo contém ligandos de afinidade que indicam se a amostra foi atravessada e se as biomoléculas no bloco conjugado estão activas. Depois de passar por estas zonas de reação, o fluido entra no material poroso final, o pavio, que funciona simplesmente como um recipiente de resíduos.
Existem dois tipos de LFT: o método direto e o método competitivo.
O LFT direto (sanduíche) utiliza um conjugado anticorpo-tag infligido a uma membrana conjugada. Os anticorpos específicos para este analito são imobilizados na linha de teste e os anticorpos anti-espécie específicos para anticorpos primários são imobilizados na linha de controlo. Quando a amostra, que contém uma substância analisada, é aplicada à banda de teste e esta amostra atinge a membrana com o conjugado, a substância a analisar liga-se ao conjugado AT-tag. Em seguida, o complexo imune entra na zona de teste, onde se liga a anticorpos específicos, formando uma "sanduíche" de Ab-Ag-Ab-tag. O excesso de conjugado não ligado liga-se a anticorpos anti-espécie na linha de controlo. Por conseguinte, a presença de 2 linhas na tira de teste representa um resultado positivo. Se não houvernenhuma substância analisada na amostra, o conjugado liga-se aos anticorpos anti-espécie apenas na linha de controlo, formando uma linha na tira de teste. O método direto de LFT é utilizado para detetar compostos de elevado peso molecular - vírus, incluindo o VIH; várias hormonas (por exemplo, em testes de gravidez), agentes patogénicos de doenças infecciosas.
O métodoLFT competitivo, utilizado para a determinação de compostos de baixo peso molecular, baseia-se na competição entre a substância a analisar e o conjugado imobilizado substância a analisar:proteína transportadora por um número limitado de locais de ligação para anticorpos específicos contidos no conjugado Ab-tag. Quando se aplica uma amostra que contém a substância a analisar, esta liga-se ao conjugado AT-tag na membrana do conjugado. Em seguida, o complexo imunitário passa através da zona de teste, onde o conjugado analito:proteína transportadora está imobilizado. O imunocomplexo não pode ligar-se a este conjugado devido a obstáculos estéricos: os compostos de baixo peso molecular têm normalmente um determinante antigénico e, consequentemente, os anticorpos têm um local de ligação ao antigénio, que já está ocupado pela substância a analisar. Em seguida, o complexo imune é ligado por anticorpos anti-espécie na linha de controlo. Como resultado, a ausência de uma banda colorida na zona de teste e a presença de uma cor na zona de controlo indica que a concentração da substância a analisar na amostra de teste excede o seu valor limite para este teste.
Se não houver análise na amostra, o conjugado Ab-tag liga-se ao conjugado Ag:proteína transportadora imobilizado na zona da linha de teste. O conjugado Ab-tag não ligado entra na zona da linha de controlo e liga-se aí com anticorpos anti-espécie. Assim, a presença de duas linhas coloridas (teste e controlo) representa um resultado negativo da análise.
O formato LFT competitivo é utilizado para detetar compostos de baixo peso molecular, incluindo metabolitos de compostos narcóticos na urina, fluido oral e extractos de tecidos.
O métodoLFT competitivo, utilizado para a determinação de compostos de baixo peso molecular, baseia-se na competição entre a substância a analisar e o conjugado imobilizado substância a analisar:proteína transportadora por um número limitado de locais de ligação para anticorpos específicos contidos no conjugado Ab-tag. Quando se aplica uma amostra que contém a substância a analisar, esta liga-se ao conjugado AT-tag na membrana do conjugado. Em seguida, o complexo imunitário passa através da zona de teste, onde o conjugado analito:proteína transportadora está imobilizado. O imunocomplexo não pode ligar-se a este conjugado devido a obstáculos estéricos: os compostos de baixo peso molecular têm normalmente um determinante antigénico e, consequentemente, os anticorpos têm um local de ligação ao antigénio, que já está ocupado pela substância a analisar. Em seguida, o complexo imune é ligado por anticorpos anti-espécie na linha de controlo. Como resultado, a ausência de uma banda colorida na zona de teste e a presença de uma cor na zona de controlo indica que a concentração da substância a analisar na amostra de teste excede o seu valor limite para este teste.
Se não houver análise na amostra, o conjugado Ab-tag liga-se ao conjugado Ag:proteína transportadora imobilizado na zona da linha de teste. O conjugado Ab-tag não ligado entra na zona da linha de controlo e liga-se aí com anticorpos anti-espécie. Assim, a presença de duas linhas coloridas (teste e controlo) representa um resultado negativo da análise.
O formato LFT competitivo é utilizado para detetar compostos de baixo peso molecular, incluindo metabolitos de compostos narcóticos na urina, fluido oral e extractos de tecidos.
Explicação mais simples.
Se não perceber, explico de uma forma mais simples. Existem anticorpos marcados no início de cada tira de teste. Devido à estrutura da tira de teste, a urina espalha-se ao longo da mesma, transportando os complexos resultantes para a área de teste, onde os ligamentos fármaco-proteína são fixados. Uma vez que o anticorpo do complexo imunitário que chegou já foi absorvido pelo fármaco da urina, não consegue fixar-se na zona de teste e desloca-se para a zona de controlo, onde se liga ao anticorpo anti-espécie, colorindo uma tira na escala (resultado positivo).
Se não houver droga na amostra biológica, os anticorpos deslocam-se na urina ao longo da tira de teste, permanecendo livres. Quando o complexo anticorpo-proteína se encontra na zona de teste, alguns anticorpos marcados ligam-se a ele (aparece a primeira tira), o resto move-se com o fluxo de urina na zona de controlo, onde também se liga ao anticorpo anti-espécie, destacando a segunda tira (2 tiras - resultado negativo). Se a linha aparecer na zona de teste mas não aparecer na zona de controlo (deve aparecer sempre) - o teste está defeituoso.
Se não houver droga na amostra biológica, os anticorpos deslocam-se na urina ao longo da tira de teste, permanecendo livres. Quando o complexo anticorpo-proteína se encontra na zona de teste, alguns anticorpos marcados ligam-se a ele (aparece a primeira tira), o resto move-se com o fluxo de urina na zona de controlo, onde também se liga ao anticorpo anti-espécie, destacando a segunda tira (2 tiras - resultado negativo). Se a linha aparecer na zona de teste mas não aparecer na zona de controlo (deve aparecer sempre) - o teste está defeituoso.
As substâncias foram utilizadas por voluntários que não tomaram nada de psicoativo durante um período de tempo suficiente, tendo sido recolhida urina para a sua análise. Eis os resultados da experiência.
Experiências.
AMPHETAMINAMetabolitos principais: anfetamina, 4-hidroxianfetamina, 4-hidroxinorefedrina, 4-hidroxifenilacetona, ácido benzoico, ácido hipúrico, norefedrina, fenilacetona.
COCAÍNA.
Metabolitos principais: benzoilecgonina, éster metílico da ecgonina, ecgonina, norcocaína, p-hidroxicaína, m-hidroxicaína, p-hidroxibenzolecgonina, m-hidroxibenzolecgonina.
Se olhar para o teste à direita, pode ver porque é que as tiras de teste têm de ser manuseadas com um ponto de vista crítico. A pessoa testada não consumiu recentemente qualquer PAS, exceto cocaína.
HEROÍNA.
Metabolitos principais: morfina, normorfina, hidromorfona.
MDMA / ECSTASY.
Metabolitos principais: 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA), 3,4-metilenodioxianfetamina (MDA), 4-hidroxi-3-metoximetanfetamina (HMMA), 4-hidroxi-3-metoxianfetamina (HMA).
Existem tiras-teste para MDMA / Ecstasy, mas são mais difíceis de encontrar. A anfetamina e a metanfetamina foram encontradas na urina. Este facto explica-se pela sua pertença comum à mesma classe e, consequentemente, pela semelhança estrutural das substâncias e dos seus metabolitos. As escalas de THC (canabinóides) e OPI (opiáceos) no segundo teste não participam na experiência (não são activadas). De acordo com a fotografia da esquerda, estas substâncias não são detectadas em ligação com o consumo de MDMA.
MEFEDRONA.
Metabolitos principais: mefedrona, nor-mefedrona, 4'-carboxi-mefedrona, 1'-dihidro-mefedrona, N-succinil-nor-mefedrona.
Um comentário interessante dos editores do sítio https://www.zoomtesting.co.uk,"Alguns vendedores referem que um teste de metanfetamina pode ser utilizado para detetar a mefedrona. No entanto, isto é incorreto. A estrutura química da metanfetamina e da mefedrona é diferente, pelo que o teste da metanfetamina não é válido para a mefedrona". Bem, vamos lá ver isso.
Para além das substâncias padrão, foi utilizada uma outra tira de teste para testar barbitúricos. Há claramente algo de errado com esta tira de teste. O teste foi repetido por outro voluntário que nunca tinha consumido barbitúricos ou preparações que os contivessem, com um resultado semelhante.
ALFA-PVP (alfa-pirrolidinovalerofenona).
A segunda linha na janela do PCP está quase completamente ausente.
MARIJUANA.
Metabolitos principais: tetrahidrocanabinol (THC), 11-hidroxi-THC, 11-nor-9-carboxi-THC. Cannabis bem determinada e sempre apenas na sua janela "THC" (tetrahidrocanabinol), é suficiente para demonstrar no teste mais simples.
Conclusão.
Os testes têm vindo a detetar drogas nos fluidos corporais há muito mais tempo do que o seu efeito psicoativo é sentido. São bastante baratos, têm uma boa sensibilidade e são apenas marginalmente inferiores aos métodos utilizados em laboratório. Lembre-se da sua segurança - se houver necessidade de verificar a sua "limpeza", os testes expressos serão indispensáveis.
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