Inledande text.
Hur fungerar tunnskiktskromatografi?
Förberedelse.
Framställning av kromatogram.
Ta en plast- eller glasburk, häll 10-15 ml vatten, 4-5 droppar jodalkohollösning. Rör om i 7-10 minuter. Töm ut vattnet. Jod fälls ut i vatten på sidorna av burken. Lägg burken i en behållare.
Retentionsfaktor
När en separation är klar framträder enskilda föreningar som fläckar som är separerade vertikalt. Varje fläck har en retentionsfaktor (Rf) som är lika med den sträcka som migrerats i förhållande till den totala sträcka som lösningsmedlet täcker. Rf-formeln är Rf= sträcka som tillryggalagts av provet/ sträcka som tillryggalagts av lösningsmedlet.
Rf-värdet kan användas för att identifiera föreningar på grund av att det är unikt för varje förening. När man jämför två olika föreningar under samma förhållanden är föreningen med det större Rf-värdet mindre polär eftersom den inte fastnar i den stationära fasen lika länge som den polära föreningen, som skulle ha ett lägre Rf-värde. Rf-värden och reproducerbarhet kan påverkas av ett antal olika faktorer, t.ex. skikttjocklek, fukt på TLC-plattan, kärlmättnad, temperatur, mobilfasens djup, TLC-plattans beskaffenhet, provstorlek och lösningsmedelsparametrar. Dessa effekter leder normalt till en ökning av Rf-värdena. När det gäller skikttjocklek skulle dock Rf-värdet minska eftersom den mobila fasen rör sig långsammare uppför plattan.
Diskussion om resultat
Metamfetamin - 0,55
Mefedron - 0,65
Slutsats.
Kromatografi används för att separera blandningar av ämnen i sina beståndsdelar. Alla former av kromatografi fungerar enligt samma princip. I den här artikeln kommer jag att förklara denna metod genom att definiera Rf för amfetamin, metamfetamin och mefedron.
Kromatografiska plattor har en stationär fas (ett fast ämne eller en vätska på ett fast ämne) och en mobil fas (en vätska eller en gas). Den mobila fasen strömmar genom den stationära fasen och för med sig komponenterna i blandningen. Olika komponenter rör sig med olika hastighet. Vi ska titta närmare på orsakerna till detta längre ner på sidan. Tunnskiktskromatografi utförs precis som det står - med ett tunt, enhetligt lager av kiselgel eller aluminiumoxid som är belagt på en bit glas, metall eller styv plast. Kiselgelen (eller aluminiumoxiden) är den stationära fasen. Den stationära fasen för tunnskiktskromatografi innehåller också ofta ett ämne som fluorescerar i UV-ljus eller jodkammare - av skäl som du kommer att se senare. Den mobila fasen är ett lämpligt flytande lösningsmedel eller en blandning av lösningsmedel.
Kromatografiska plattor har en stationär fas (ett fast ämne eller en vätska på ett fast ämne) och en mobil fas (en vätska eller en gas). Den mobila fasen strömmar genom den stationära fasen och för med sig komponenterna i blandningen. Olika komponenter rör sig med olika hastighet. Vi ska titta närmare på orsakerna till detta längre ner på sidan. Tunnskiktskromatografi utförs precis som det står - med ett tunt, enhetligt lager av kiselgel eller aluminiumoxid som är belagt på en bit glas, metall eller styv plast. Kiselgelen (eller aluminiumoxiden) är den stationära fasen. Den stationära fasen för tunnskiktskromatografi innehåller också ofta ett ämne som fluorescerar i UV-ljus eller jodkammare - av skäl som du kommer att se senare. Den mobila fasen är ett lämpligt flytande lösningsmedel eller en blandning av lösningsmedel.
Kiselgel är en form av kiseldioxid (silica). Kiselatomerna är sammanfogade via syreatomer i en gigantisk kovalent struktur. På ytan av kiselgelen är dock kiselatomerna bundna till -OH-grupper. Så på ytan av kiselgelen har du Si-O-H-bindningar i stället för Si-O-Si-bindningar. Diagrammet visar en liten del av kiselytan. Ytan på kiselgelen är mycket polär och kan på grund av -OH-grupperna bilda vätebindningar med lämpliga föreningar runt omkring sig samt Van-der-Waals dispersionskrafter och dipol-dipol-attraktioner.
Du behöver:
1. Sprutor för 5 ml х 4
2. Urinprovsburk i plast х 4
3. Stora plastbehållare för mat (eller en stor bägare och plastbehållare) х 2
4. TLC-platta med kiselgelskikt 5x10 cm (du kan klippa den stora med en sax)
5. Lösningsmedel etylacetat, metanol, hexan (kan ersättas med koltetraklorid), ammoniak vattenlösning 10% eller högre, jod alkohollösning
6. Mjuk penna, linjal och tång
Glöm inte handskar och andningsskydd, utför experimentet i ett ventilerat rum.
1. Sprutor för 5 ml х 4
2. Urinprovsburk i plast х 4
3. Stora plastbehållare för mat (eller en stor bägare och plastbehållare) х 2
4. TLC-platta med kiselgelskikt 5x10 cm (du kan klippa den stora med en sax)
5. Lösningsmedel etylacetat, metanol, hexan (kan ersättas med koltetraklorid), ammoniak vattenlösning 10% eller högre, jod alkohollösning
6. Mjuk penna, linjal och tång
Glöm inte handskar och andningsskydd, utför experimentet i ett ventilerat rum.
Framställning av kromatogram.
1. Du måste förbereda en flytande lösning etylacetat:metanol:ammoniaklösning 85:10:5. För 10 ml måste du ta 8,5 ml etylacetat, 1 ml metanol och 0,5 ml ammoniaklösning och blanda den.
2. Rengör plattan med silikagel med denna lösning. Placera plattan i lösningen, den måste vara 3-4 mm djup i en stor bägare (som på bild 1). Du kan använda en pincett för bekvämare manipulationer. Viktigt: blöt inte plattan med vatten eftersom den då blir förstörd. Du måste hålla plattan i lösningen tills lösningsmedlets framsida når upp till plattans övre kant.
Bild
3. Vi börjar med ett enkelt fall. Det finns fyra substanser: amfetamin (A), metamfetamin (L), koffein (K) och mefedron (M).
För detta experiment måste du få fri bas av droger. Lägg 10-15 mg av provet (några klumpar) i en glasburk (plast), ren två droppar vattenhaltig ammoniaklösning. Häll sedan 3-4 droppar hexan eller koltetraklorid och skaka den en minut. Den fria basen av ditt läkemedel späds ut i det organiska skiktet.
med fri bas
4. Nu måste du placera den på kromatografiplattan, som förbereddes tidigt. Ta en nål från en spruta och klipp av den med en tång, som i exemplet. Du måste få en platt kant.
Ta en ren och torkad platta och dra en blyertslinje ~5-6 mm upp från den nedre kanten. Eventuell märkning på plattan för att visa droppens ursprungliga position måste också göras med blyerts. Om något av detta gjordes med bläck, skulle färgämnena från bläcket också röra sig när kromatogrammet utvecklades. Markera fyra prickar med lika stort avstånd mellan dem. Sänk ner änden av den avklippta nålen i det organiska skiktet av den första narkoslösningen. Rör vid plattan med nålspetsen och gör en liten fläck 3-4 mm i diameter, vänta tills den torkar, upprepa proceduren 10 gånger. Upprepa steg 2, 3 för andra substanser.
Vanligt misstag: Gör inte en stor fettfläck, eftersom din substans kan överlagra andra substanser under experimentet.
5. När fläckarna av fria baser är torra ställs plattan i ett grunt lager av lösningsmedel i en täckt bägare. Det är viktigt att lösningsmedlets nivå ligger under linjen med fläcken på. Vänta tills lösningsmedlets frontlinje når 4-5 mm före plattans övre kant och dra ut den. Rita sedan en blyertslinje på lösningsmedlets främre linje. Torka den på luft.
6. Kromatogrammet placeras i en sluten behållare (t.ex. en annan bägare täckt med ett klockglas eller stora plastbehållare) tillsammans med några jodkristaller. Jodångan i behållaren reagerar med fläckar på kromatogrammet. De ämnen som du är intresserad av kan dyka upp som färgade fläckar. Spåra dem med en blyertspenna och rita prickar i mitten av varje fläck.
Du kan också använda en UV-lampa med våglängderna 254 och 365 nm.
Hur man förbereder jodkammaren.Vanligt misstag: Gör inte en stor fettfläck, eftersom din substans kan överlagra andra substanser under experimentet.
5. När fläckarna av fria baser är torra ställs plattan i ett grunt lager av lösningsmedel i en täckt bägare. Det är viktigt att lösningsmedlets nivå ligger under linjen med fläcken på. Vänta tills lösningsmedlets frontlinje når 4-5 mm före plattans övre kant och dra ut den. Rita sedan en blyertslinje på lösningsmedlets främre linje. Torka den på luft.
Ta en plast- eller glasburk, häll 10-15 ml vatten, 4-5 droppar jodalkohollösning. Rör om i 7-10 minuter. Töm ut vattnet. Jod fälls ut i vatten på sidorna av burken. Lägg burken i en behållare.
Retentionsfaktor
När en separation är klar framträder enskilda föreningar som fläckar som är separerade vertikalt. Varje fläck har en retentionsfaktor (Rf) som är lika med den sträcka som migrerats i förhållande till den totala sträcka som lösningsmedlet täcker. Rf-formeln är Rf= sträcka som tillryggalagts av provet/ sträcka som tillryggalagts av lösningsmedlet.
I experimentet har jag fått tre fläckar i stället för de förväntade fyra. Upprepning av experimentet visar att koffein inte elueras med lösning av etylcetat:metanol:ammoniaklösning 85:10:5. Experimentellt godkändes att denna lösning är lämplig för eluering av droger som amfetamin, metamfetamin och mefedron.
Rf för studerade läkemedel.
Amfetamin - 0,53Metamfetamin - 0,55
Mefedron - 0,65
Förklaring.
Jag har fått två plattor med resultat. Två uppmätta avstånd mellan startpunkten och mitten av den inringade fläcken. Amfetaminfläcken gick 42 i den första plattan och 49 mm i den andra plattan från startlinjen, lösningsmedelsfrontlinjen gick 85 respektive 86 mm. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Sedan räknade jag ut aritmetiskt medelvärde 0,53. Samma beräkningar gjordes för andra ämnen.
Jag har fått två plattor med resultat. Två uppmätta avstånd mellan startpunkten och mitten av den inringade fläcken. Amfetaminfläcken gick 42 i den första plattan och 49 mm i den andra plattan från startlinjen, lösningsmedelsfrontlinjen gick 85 respektive 86 mm. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Sedan räknade jag ut aritmetiskt medelvärde 0,53. Samma beräkningar gjordes för andra ämnen.
Slutsats.
Som experimentet visar kan du mäta Rf för din drog och jämföra med känd substans i samma platta. Gör en fläck av din drogfria bas och 1-4 fläckar av andra droger för att kontrollera Rf. Om fläckarna befinner sig på samma avstånd från startlinjen är det troligen samma substans. Om du får flera fläckar från ditt läkemedel har du förmodligen en blandning av ämnen. Vissa läkemedel har flera fläckar eftersom de är en blandning av läkemedel och biprodukter från syntes. Du kan dock jämföra dem med andra droger med hjälp av tunnskiktskromatografi.
Attachments
Last edited by a moderator:
