İlaçlar için GC-MS yöntemleri

[G.Patton]

Giriş:

Kromatografi-kütle spektrometresi ile ilaçların kalitesini belirleme konusunda geniş deneyime sahibim. Bu talimatı, ilaçları GC-MS ekipmanı ile test etmeye başlamak isteyen kimyagerler için yazmaya karar verdim.
Çok çeşitli kromato-kütle spektrometresi olanaklarına rağmen, olanakların sınırlamaları vardır. Kromatograf ile birlikte kullanılan kütle dedektörü inorganik maddeleri, molekül ağırlığı 450 Da'dan fazla olan organik maddeleri veya yüksek kaynama sıcaklığına (>350 ◦C) sahip organik maddeleri belirleyemez.

Ekipman özellikleri:

İlk olarak, gaz kromatografınızı kullanarak analiz sağlama olasılığınızı tanımlamanız gerekir. Agilent 7890 gaz kromatografı, Agilent 5975C kuadrupol kütle dedektörü veya Thermo Scientific ISQ 7000 Single Quadrupole GC-MS ile birleştirilmiş en popüler uygun GC-MS sistemleri bu amaçlar için kullanılabilir. Bilmeniz gereken ana özellik, bir kapiler kolonun polaritesidir. İlaçların çoğu için polaritesi olmayan veya zayıf polariteli kapiler kolona ihtiyacınız vardır. Örneğin, HP-1/DB-1 veya HP-5/DB-5 geniş bir uygulama yelpazesi için en iyi seçimdir. Ayrıca, kütle dedektörünüzün SCAN modunda algılayabileceği kütle aralığını da bilmeniz gerekir. Genellikle, 30-450 m/z aralığına ihtiyacınız vardır, bu her tür ilacı belirlemek için yeterlidir. Çoğu 30-350 m/z arasında belirlenebilir.

Örnek hazırlama prosedürü:

Tüm ilaçlar, yapısal değişiklik olmadan uzun süre saklanmalarına izin veren daha yüksek stabilite nedeniyle tuz formunda kalır. Örneğin, amfetamin azot atomuna sahiptir, 2-(SO4), -Cl, 3-(PO4) gibi asit iyon(lar)ı ile bağlı olan bazdır. Analiz maddesinin serbest bazını elde etmeniz gerekir. Ayrıca, analiz için hangi maddeye sahip olduğunuzu bilmiyorsanız, daha önce bahsettiğim reaktifleri(İlaç test reaktifleri) kullanarak kalitatif belirleme deneyine devam etmeniz gerekir.

Evrensel hazırlama oldukça basit olacaktır. Numunenin alikotunu bir şişeye koyun ve saf bir çözücü (CCl4/ CH2Cl2) ile doldurun. Çözeltiden yaklaşık 10-1000 mkg/ml hazırlayın. Narkotik maddelerin çoğu karbon tetraklorür/diklorometan içinde çözülemez. Daha sonra, bu şişeye 1-2 hacim %30-40 NaOH/KOH sulu çözeltisini ilaç çözeltisi ile eklemeniz ve iyice karıştırmanız gerekir.

İşaretler(LSD, NBOMe, NBOH vb.) için hemen hemen aynı hazırlık kullanılır. Beyan edilen miktarda madde ile bir işaret alın ve şişeye kesin, saf çözücü ekleyin (CH2Cl2 önerilir). Yaklaşık 10-1000 mkg/ml çözelti hazırlayın. Daha sonra, bu şişeye 1-2 hacim %30-40 NaOH/KOH sulu çözeltisini ilaç çözeltisi ile eklemeniz ve iyice karıştırmanız gerekir.

Organik çözücü katmanına geçecek olan analiz edilen ilacın serbest bazını elde edeceksiniz. 1 mkl ilaç çözeltisi enjekte etmeli ve analize başlamalısınız.

GC-MS yöntemleri.
Çok çeşitli ilaçlar için:

GC-MS sistemi elektron iyonizasyon modunda 70 eV'de çalışmaktadır. Cihaz, %5 fenil-metilsilikon kapiler kolon (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m film kalınlığı) ile donatılmıştır. Taşıyıcı gaz olarak 1 mL/dak sabit akışta helyum kullanılmıştır. Kromatografik koşullar aşağıdaki gibi ayarlanmıştır: Fırın sıcaklığı 130 ◦C'de 2 dakika tutulmuş, 15 ◦C/dk'da 270 ◦C'ye yükseltilmiştir. Enjeksiyon portu 270 ◦C'de split modunda split raito 25:1 ile ayarlanmıştır. Kütle dedektörü tarama modunda çalışır (tarama aralığı m/z 30-390).

LSD, NBOMe, NBOH işaretleri için:

GC-MS sistemi elektron iyonizasyon modunda 70 eV'de çalışmaktadır. Cihaz, %5 fenil-metilsilikon kapiler kolon (30 m × 0,25 mm i.d., 0,25 m film kalınlığı) ile donatılmıştır. Helyum, 1 mL/dak'lık sabit bir akışta taşıyıcı gaz olarak kullanılır. Kromatografik koşullar aşağıdaki gibi ayarlanmıştır: Fırın sıcaklığı 2 dakika boyunca 40 ◦C'de tutulur, 15 ◦C/dk'da 210 ◦C'ye çıkarılır, 5 ◦C/dk'da 280 ◦C'ye çıkarıldıktan sonra 20 dakika tutulur. Enjeksiyon portu bölünmemiş modda 280 ◦C'ye ayarlanmıştır. Kütle dedektörü tarama modunda çalıştırıldı (tarama aralığı m/z 30-450).

Sonuçlar:
Gördüğünüz gibi, numunelerin hazırlanması oldukça basittir. Pahalı reaktifler veya zor manipülasyonlar gerektirmez. Ancak, bu prosedür ilgili analiz sonuçlarını elde etmek için çok önemlidir.

 

[Cocojamba]

Peki ya başka GC-MS sistemleri? Ya da bu yöntemler yalnızca Agilent veya Thermo Scientific ile mi çalışıyor?

 

[G.Patton]

Aslında, hayır, aynı özelliklere sahip herhangi bir sistemi kullanabilirsiniz.