Giriş.
İnce tabaka kromatografisi nasıl çalışır?
Hazırlanıyor.
Kromatogramın üretilmesi.
Bir plastik veya cam kavanoz alın, 10-15 ml su, 4-5 damla iyot alkol çözeltisi dökün. 7-10 dakika boyunca karıştırın. Suyu boşaltın. İyot kavanozun kenarlarında su içinde çökelir. Bu kavanozu bir kaba koyun.
Saklama Faktörü
Bir ayırma işlemi tamamlandıktan sonra, tek tek bileşikler dikey olarak ayrılmış noktalar halinde görünür. Her bir nokta, çözücü tarafından kat edilen toplam mesafe üzerinden taşınan mesafeye eşit olan bir alıkonma faktörüne (Rf) sahiptir. Rf formülü Rf= numune tarafından kat edilen mesafe/çözücü tarafından kat edilen mesafe şeklindedir.
Rf değeri, her bir bileşiğe özgü olması nedeniyle bileşikleri tanımlamak için kullanılabilir. Aynı koşullar altında iki farklı bileşik karşılaştırıldığında, daha büyük Rf değerine sahip olan bileşik daha az polardır çünkü daha düşük Rf değerine sahip olan polar bileşik kadar uzun süre sabit faza yapışmaz. Rf değerleri ve tekrarlanabilirlik, tabaka kalınlığı, TLC plakasındaki nem, kap doygunluğu, sıcaklık, mobil faz derinliği, TLC plakasının yapısı, numune boyutu ve çözücü parametreleri gibi bir dizi farklı faktörden etkilenebilir. Bu etkiler normalde Rf değerlerinde artışa neden olur. Ancak, tabaka kalınlığı durumunda, mobil faz plakada daha yavaş hareket ettiği için Rf değeri düşecektir.
Sonuçların tartışılması
Metamfetamin - 0,55
Mephedrone - 0,65
Sonuç.
Kromatografi, madde karışımlarını bileşenlerine ayırmak için kullanılır. Kromatografinin tüm formları aynı prensiple çalışır. Bu makalede, Amfetamin Metamfetamin ve Mefedron'un Rf'sini tanımlayarak bu yöntemi açıklayacağım.
Kromatografi plakalarında bir sabit faz (bir katı veya bir katı üzerinde desteklenen bir sıvı) ve bir mobil faz (bir sıvı veya bir gaz) bulunur. Hareketli faz sabit faz boyunca akar ve karışımın bileşenlerini de beraberinde taşır. Farklı bileşenler farklı hızlarda hareket eder. Bunun nedenlerini sayfanın ilerleyen kısımlarında inceleyeceğiz. İnce tabaka kromatografisi tam olarak söylendiği gibi yapılır - bir cam, metal veya sert plastik parçası üzerine kaplanmış ince, düzgün bir silika jel veya alümina tabakası kullanılarak. Silika jel (veya alümina) sabit fazdır. İnce tabaka kromatografisi için sabit faz, daha sonra göreceğiniz nedenlerden dolayı genellikle UV ışığında veya iyot odasında floresan olan bir madde içerir. Hareketli faz uygun bir sıvı çözücü veya çözücü karışımıdır.
Kromatografi plakalarında bir sabit faz (bir katı veya bir katı üzerinde desteklenen bir sıvı) ve bir mobil faz (bir sıvı veya bir gaz) bulunur. Hareketli faz sabit faz boyunca akar ve karışımın bileşenlerini de beraberinde taşır. Farklı bileşenler farklı hızlarda hareket eder. Bunun nedenlerini sayfanın ilerleyen kısımlarında inceleyeceğiz. İnce tabaka kromatografisi tam olarak söylendiği gibi yapılır - bir cam, metal veya sert plastik parçası üzerine kaplanmış ince, düzgün bir silika jel veya alümina tabakası kullanılarak. Silika jel (veya alümina) sabit fazdır. İnce tabaka kromatografisi için sabit faz, daha sonra göreceğiniz nedenlerden dolayı genellikle UV ışığında veya iyot odasında floresan olan bir madde içerir. Hareketli faz uygun bir sıvı çözücü veya çözücü karışımıdır.
Silika jel bir silikon dioksit (silika) formudur. Silisyum atomları oksijen atomları aracılığıyla dev bir kovalent yapıda birleşmiştir. Bununla birlikte, silika jelin yüzeyinde, silikon atomları -OH gruplarına bağlanır. Yani, silika jelin yüzeyinde Si-O-Si bağları yerine Si-O-H bağları vardır. Diyagram silika yüzeyinin küçük bir kısmını göstermektedir. Silika jelin yüzeyi çok polardır ve -OH grupları nedeniyle etrafındaki uygun bileşiklerle hidrojen bağlarının yanı sıra Van-der-Waals dağılım kuvvetleri ve dipol-dipol çekimleri oluşturabilir.
İhtiyacınız olan
1. 5 ml х 4 için şırınga
2. Plastik idrar test kavanozu х 4
3. Yiyecekler için büyük plastik kaplar (veya bir büyük beher ve plastik kap) х 2
4. 5x10 cm silika jel tabakalı TLC plakası (büyük olanı makasla kesebilirsiniz)
5. Çözücüler etil asetat, metanol, hekzan (karbon tetraklorür ile ikame edilebilir), %10 veya daha yüksek amonyak sulu çözeltisi, iyot alkol çözeltisi
6. Yumuşak kurşun kalem, cetvel ve pense
Eldiven ve solunum cihazını unutmayın, havalandırmalı bir odada deney yapın.
1. 5 ml х 4 için şırınga
2. Plastik idrar test kavanozu х 4
3. Yiyecekler için büyük plastik kaplar (veya bir büyük beher ve plastik kap) х 2
4. 5x10 cm silika jel tabakalı TLC plakası (büyük olanı makasla kesebilirsiniz)
5. Çözücüler etil asetat, metanol, hekzan (karbon tetraklorür ile ikame edilebilir), %10 veya daha yüksek amonyak sulu çözeltisi, iyot alkol çözeltisi
6. Yumuşak kurşun kalem, cetvel ve pense
Eldiven ve solunum cihazını unutmayın, havalandırmalı bir odada deney yapın.
Kromatogramın üretilmesi.
1. Akıcı bir etil asetat:metanol:amonyak çözeltisi 85:10:5 hazırlamanız gerekmektedir. 10 ml için 8,5 ml etil asetat, 1 ml metanol ve 0,5 ml amonyak çözeltisi alıp karıştırmanız gerekir.
2. Plakayı silika jel ile bu çözeltiden temizleyin. Plakayı çözeltinin içine koyun, büyük beherde 3-4 mm derinlikte olmalıdır (resim 1'deki gibi). Rahat manipülasyon için cımbız kullanabilirsiniz. Önemli: plakayı su ile ıslatmayın çünkü bozulacaktır. Plakayı, çözücünün ön kısmı plakanın üst kenarına gelene kadar çözeltinin içinde tutmalısınız.
3. Basit bir vaka ile başlayacağız. Dört madde var: amfetamin(A), metamfetamin (L), kafein (K) ve mephedrone (M).
Bu deney için, uyuşturucuların serbest bazını almanız gerekir. 10-15 mg numuneyi (birkaç topak) bir cam (plastik) kavanoza koyun, iki damla sulu amonyak çözeltisini saflaştırın. Ardından 3-4 damla hekzan veya karbon tetraklorür dökün ve bir dakika çalkalayın. İlacınızın serbest bazı organik tabaka içinde seyreltilir.4. Şimdi bunu daha önce hazırlanmış olan kromatografi plakasına yerleştirmeniz gerekir. Bir şırıngadan bir iğne alın ve örnekteki gibi pense ile kesin. Düz bir kenar elde etmeniz gerekir.
Temiz ve kuru bir plaka alın ve alt kenardan ~5-6 mm yukarıya kurşun kalemle bir çizgi çizin. Damlanın orijinal konumunu göstermek için plaka üzerindeki herhangi bir etiketleme de kurşun kalemle yapılmalıdır. Bu işlemlerden herhangi biri mürekkeple yapılmışsa, kromatogram geliştikçe mürekkepteki boyalar da hareket edecektir. Aralarında eşit mesafe olan dört nokta işaretleyin. Kırpılmış iğnenin ucunu ilk narkotik çözeltinin organik tabakasına daldırın. İğnenin ucuyla plakaya dokunun ve 3-4 mm çapında küçük bir nokta oluşturun, kuruyana kadar bekleyin, işlemi 10 kez tekrarlayın. Diğer maddeler için 2., 3. aşamaları tekrarlayın.
Yaygın hata: büyük yağ lekesi yapmayın, çünkü maddeniz deney sırasında başka maddelerin üzerine binebilir.
5. Serbest bazların lekeleri kuruduğunda, plaka kapalı bir beherde sığ bir çözücü tabakası içinde bekletilir. Çözücü seviyesinin üzerinde leke bulunan çizginin altında olması önemlidir. Çözücü ön çizgisi plakanın üst kenarından 4-5 mm önceye ulaşana kadar bekleyin ve dışarı çekin. Ardından, çözücünün ön çizgisine kurşun kalemle bir çizgi çizin. Hava ile kurutun.
6. Kromatogram, birkaç iyot kristali ile birlikte kapalı bir kaba (saat camı ile kaplı başka bir beher veya büyük plastik kaplar gibi) yerleştirilir. Kaptaki iyot buharı kromatogram üzerindeki noktalarla reaksiyona girer. İlgilendiğiniz maddeler renkli noktalar olarak görünebilir. Bir kalemle izlerini sürün ve her bir noktanın ortasına noktalar çizin.
Ayrıca 254 ve 365 nm dalga boyuna sahip UV lamba da kullanabilirsiniz.
İyot haznesi nasıl hazırlanır.Yaygın hata: büyük yağ lekesi yapmayın, çünkü maddeniz deney sırasında başka maddelerin üzerine binebilir.
5. Serbest bazların lekeleri kuruduğunda, plaka kapalı bir beherde sığ bir çözücü tabakası içinde bekletilir. Çözücü seviyesinin üzerinde leke bulunan çizginin altında olması önemlidir. Çözücü ön çizgisi plakanın üst kenarından 4-5 mm önceye ulaşana kadar bekleyin ve dışarı çekin. Ardından, çözücünün ön çizgisine kurşun kalemle bir çizgi çizin. Hava ile kurutun.
Bir plastik veya cam kavanoz alın, 10-15 ml su, 4-5 damla iyot alkol çözeltisi dökün. 7-10 dakika boyunca karıştırın. Suyu boşaltın. İyot kavanozun kenarlarında su içinde çökelir. Bu kavanozu bir kaba koyun.
Saklama Faktörü
Bir ayırma işlemi tamamlandıktan sonra, tek tek bileşikler dikey olarak ayrılmış noktalar halinde görünür. Her bir nokta, çözücü tarafından kat edilen toplam mesafe üzerinden taşınan mesafeye eşit olan bir alıkonma faktörüne (Rf) sahiptir. Rf formülü Rf= numune tarafından kat edilen mesafe/çözücü tarafından kat edilen mesafe şeklindedir.
Deneyde beklenen dört nokta yerine üç nokta elde ettim. Deneyin tekrarlanması, kafeinin etil setat:metanol:amonyak çözeltisi 85:10:5 ile elüe edilemediğini göstermektedir. Bu çözeltinin amfetamin, metamfetamin ve mefedron gibi ilaçları elüe etmek için uygun olduğu deneysel olarak onaylanmıştır.
Çalışılan ilaçların Rf 'si.
Amfetamin - 0,53Metamfetamin - 0,55
Mephedrone - 0,65
Açıklama.
Elimde sonuçları olan iki plaka var. Başlangıç noktası ile çevrelenmiş noktanın ortası arasında ölçülen iki mesafe. Amfetamin noktası başlangıç çizgisinden ilk plakada 42 ve ikinci plakada 49 mm, çözücü ön çizgisi sırasıyla 85 ve 86 mm gitti. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Daha sonra aritmetik ortalamayı 0.53 olarak hesapladım. Aynı hesaplamalar diğer maddeler için de yapıldı.
Elimde sonuçları olan iki plaka var. Başlangıç noktası ile çevrelenmiş noktanın ortası arasında ölçülen iki mesafe. Amfetamin noktası başlangıç çizgisinden ilk plakada 42 ve ikinci plakada 49 mm, çözücü ön çizgisi sırasıyla 85 ve 86 mm gitti. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Daha sonra aritmetik ortalamayı 0.53 olarak hesapladım. Aynı hesaplamalar diğer maddeler için de yapıldı.
Sonuç.
Deneyin gösterdiği gibi, ilacınızın Rf değerini ölçebilir ve aynı plakada bilinen madde ile karşılaştırabilirsiniz. Rf'yi kontrol etmek için ilacınızın serbest bazından bir nokta ve diğer ilaçlardan 1-4 nokta oluşturun. Eğer noktalar başlangıç çizgisinden aynı uzaklıktaysa, muhtemelen aynı maddedirler. Ayrıca, ilacınızdan birkaç nokta elde ederseniz, muhtemelen bir madde karışımınız vardır. Bazı ilaçların birden fazla noktası vardır çünkü bunlar ilaç ve sentez yan ürünlerinin bir karışımıdır. Bununla birlikte, ince tabaka kromatografisi kullanarak bunları diğer ilaçlarla karşılaştırabilirsiniz.
Attachments
Last edited by a moderator:
